油菜內(nèi)標準HMG I/Y 基因探針法PCR試劑盒操作方法：

1  確定PCR反應(yīng)液或其他酶促反應(yīng)液的體積。將PCR反應(yīng)液或其他酶促反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至一個新的1.5 ml離心管中，向其中加入等體積溶液BD?；旌暇鶆颉?/p>

2  將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中，靜置2min。

3  12,000 rpm離心1min，棄濾液。

   注：此時DNA片段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

       若溶液體積大于純化柱容積（800 μl），可分兩次離心。

4  加入500 μl溶液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

   注：溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋，即含80%乙醇。

       此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質(zhì)，以獲得高質(zhì)量DNA片段。

5  加入500 μl溶液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

6  12,000 rpm 離心 3min，以徹底去除純化柱中的液體。

   注：此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免殘留乙醇影響后續(xù)酶促反應(yīng)。同時也利于DNA片段的充分溶解。

7  將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的中央處，懸空滴加30-100 μl溶液Eluent（60℃預(yù)熱），靜置2min。12,000 rpm 離心1min，管底即為目的DNA片段。貯存于-20℃。

   注：溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替，但其pH需為8.0-8.5，加入體積視DNA目的片段、用戶對目的片段濃度要求而定。