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莫氏巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程

發(fā)表時(shí)間:2022-09-27
莫氏巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μ
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè).

去整合素樣金屬蛋白酶10抗體
含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族9抗體
含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族8抗體
植物生長(zhǎng)激素ABP1抗體
肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白1抗體
α紅細(xì)胞分化相關(guān)因子抗體
血管緊張素激活蛋白1抗體
Alpha清蛋白抗體
AFAP1L2抗體
神經(jīng)細(xì)胞分化相關(guān)蛋白AHNAK抗體
粘合連接相關(guān)蛋白1抗體
去整合素樣金屬蛋白酶13抗體
聚集蛋白抗體
轉(zhuǎn)錄因子AP2α+β抗體
磷酸化腺瘤樣息肉抗體
磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體
細(xì)胞周期后期促進(jìn)蛋白亞基10抗體
細(xì)胞周期后期促進(jìn)蛋白亞基11抗體
腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白2抗體
磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體
DNA修復(fù)酶相互作用蛋白抗體
脂肪細(xì)胞膜相關(guān)蛋白抗體
載脂蛋白A1結(jié)合蛋白抗體抗體
載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物1抗體
載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物2抗體
載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物3B抗體


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