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人抗細(xì)胞膜DNA抗體(cmDNA)elisa定量檢測試劑盒樣本處理及要求

發(fā)表時間:2024-09-20
人抗細(xì)胞膜DNA抗體(cmDNA)elisa定量檢測試劑盒樣本處理及要求:

1.血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標(biāo)本溶血會影響*檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

在處理完上述各類生物標(biāo)本后,確保每一步操作都嚴(yán)格遵循實驗規(guī)程,是保障實驗結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。對于細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其他生物標(biāo)本,若需長期保存以備后續(xù)分析,建議在-80℃條件下儲存,以最大限度地減少生物活性物質(zhì)的降解。同時,記錄好每批標(biāo)本的處理時間、離心條件及保存位置,便于后續(xù)追蹤與復(fù)現(xiàn)實驗。

值得注意的是,盡管離心是去除雜質(zhì)、獲取純凈樣本的重要手段,但過高的離心速度或過長的時間也可能導(dǎo)致樣本中某些敏感成分的損失或變性。因此,在選擇離心參數(shù)時,需綜合考慮樣本類型、實驗?zāi)康募邦A(yù)期結(jié)果,必要時可設(shè)置預(yù)實驗進(jìn)行優(yōu)化。

此外,對于組織勻漿的制備,除了上述提到的PBS沖洗、剪碎、研磨及離心步驟外,還需注意操作過程中的無菌原則,避免外源微生物的污染。特別是在加入蛋白酶抑制劑時,要確保其濃度適宜,既能有效抑制蛋白酶活性,又不影響后續(xù)檢測方法的靈敏度。

最后,關(guān)于溶血標(biāo)本的處理,一旦發(fā)現(xiàn)標(biāo)本溶血,應(yīng)立即標(biāo)記并單獨存放,避免與正常標(biāo)本混淆。對于溶血原因的分析,可從采血技術(shù)、抗凝劑使用、儲存條件等多方面進(jìn)行排查,以期在未來的實驗中減少類似情況的發(fā)生。同時,探索開發(fā)對溶血具有更強耐受性的檢測方法,也是提高實驗靈活性和準(zhǔn)確性的重要方向。

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