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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

釀酒酵母CACYBP (Calcyclin Binding Protein) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

潮汐紅色桿菌CALD (Caldesmon) ELISA Kit拉丁屬名: Erythrobacter gaetbuli

釀酒酵母MSR1 (Macrophage Scavenger Receptor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

纖維黃鏈霉菌CAM (Calmodulin) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

米川黃桿菌CNX (Calnexin) ELISA Kit拉丁屬名: Flavobacterium  glaciei

鏈輪枝菌屬CRT (Calreticulin) ELISA Kit 用途: 代謝產(chǎn)物具有抗菌活性。

阪崎腸桿菌CR (Calretinin) ELISA Kit拉丁屬名: Enterobacter  sakazakii

嗜線蟲賽雷氏菌CALU (Calumenin) ELISA Kit拉丁屬名: Serratia nematodiphila

蠟?zāi)?/span>CAM-Ab (Anti-Calmodulin Specific Antibody) ELISA Kit用途: 屬外生菌根菌

極小海螺菌MUC17 (Mucin 17) ELISA Kit拉丁屬名: Marinospirillum minutulum

栗疫病菌MUC2 (Mucin 2) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

肋生鹽弧菌肋生亞種MUC20 (Mucin 20) ELISA Kit拉丁屬名: Salinivibrio costicola subsp. costicola

教堂小短桿菌CNR1 (Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA Kit 拉丁屬名: Brachybacterium sacelli

多產(chǎn)色鏈霉菌CAP1 (Adenylate Cyclase Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces polychromogenes

大腸埃希菌CA125 (Carbohydrate Antigen 125) ELISA Kit  拉丁屬名: coli
滅鮭氣單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒供應(yīng)商Aggrecan  軟骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗原阿嗎定Ajmalan-17-one,21-hydroxy-, (21a)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C20H24N2O2 分 子 量:

EXPB-2  植物延展素-β（抗原）6-羥基豆甾-4-烯-3-酮6-Hydroxystigmast-4-en-3-one對照藥材 分 子 式: C29H48O2 分 子 量: 428.69022

factor VIII  第八因子相關(guān)抗原(多肽片斷抗原)鄰甲氧基肉桂酸3-(2-Methoxyphenyl)acrylic acid中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C10H10O3 分 子 量: 178.1846

FAS (Apo-a1; CD95;)(抗原)  載脂蛋白-a1紫草素(R)-5,8-Dihydroxy-2-(1-hydroxy-4-methylpent-3-en-1-yl)naphthalene-1,4-dione中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C16H16O5 分 子 量: 288.29524

Agrin peptide  聚集蛋白抗原4-羥基三尖杉堿Cephalotaxine,4-hydroxy- (9CI)對照藥材 分 子 式: C18H21NO5 分 子 量: 331.36304

Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a)  組織緊張素Ⅱ1型受體抗原宋果靈化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

FasL(抗原)  豆腐果苷Helicid中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C13H16O7 分 子 量: 284.26