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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

山岡單胞菌α1-AT (Alpha 1-Antitrypsin) ELISA Kit拉丁屬名: Collimonas pratensis

哈茨木霉PLCγ2 (Phospholipase C Gamma 2, Phosphatidylinositol Specific) ELISA Kit拉丁屬名: Trichoderma harzianum

根瘤菌α2-M (Alpha-2 Macroglobulin) ELISA Kit用途: 與紫穗槐共生固氮

尖孢α2-AP (α2-Antiplasmin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

IDUα (Alpha-L-Iduronidase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

淡黃木層孔菌NAGLU (N-Acetyl Alpha-D-Glucosaminidase) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

雞縱菌GLα (Galactosidase Alpha) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

Arthrobacterα-GST (α-glutathione S-transferases) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter phenanthrenivorans

總狀毛霉α-SCA (α-sarcomeric Actin) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor  racemosus

新月彎孢α Actin (Alpha-Actin) ELISA Kit拉丁屬名: Curvularia lunata

根瘤菌α-Glu (Alpha Glucosidase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

俏紅芝αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

德沃斯氏菌屬α-La (Alpha-Lactalbumin) ELISA Kit拉丁屬名: Devosia psychrophila

蠟狀芽孢桿菌SNCα (Synuclein Alpha) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  cereus

枯草芽孢桿菌PDGFRβ (Platelet Derived Growth Factor Receptor Beta) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis
異尖線蟲屬探針法熒光定量PCR試劑盒 Nurr1  核受體相關(guān)因子-1（抗原）DMSO(PCR級)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NT5C2  胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ10-姜烯酚8-Shogaol化學(xué)標準品 分 子 式: C19H28O3 分 子 量: 304.42382

BECN1(Beclin1)  一種基因（多肽）4-(叔辛基)苯酚4-(2,4,4-Trimethylpentan-2-yl)phenol化學(xué)標準品 分 子 式: C14H22O 分 子 量: 206.32388

OGP (Ostegenic Growth Peptide)  成骨生長肽 (骨生長激素肽)(蛋白多肽)芝麻素sesamin中藥標準品  分 子 式: C20H18O6 分 子 量: 354.36

OPN  骨橋蛋白（多肽抗原）檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液(1mol/L,pH6.0)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

BAFF/CD257(B cell activating factor)  TNF家族B細胞激活因子抗原乙酸東莨菪素酯6-Methoxy-2-oxo-2H-chromen-7-yl acetate對照藥材 分 子 式: C12H10O5 分 子 量: 234.2048

P53  抑制基因（抗原）6-羥基山奈酚3,5,6,7-tetrahydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one化學(xué)標準品 分 子 式: C15H10O7 分 子 量: 302.2357