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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準品，并將所得標(biāo)準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準品，并將所得標(biāo)準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

副干酪乳桿菌P-PKC (Phospho Protein Kinase C) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus paracasei

Bacillus aryabhattaipIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit of NF Kappa B Alpha) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

白鱗馬勃pERK ( Phospho Extracellular Signal Regulated Kinase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

抗生鏈霉菌A-CoA (Acetyl Coenzyme A) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces antibioticus (Waksman et Woodruff) Waksman et Henrici

燕麥鐮孢PI3K (Phosphoinositide-3-Kinase) ELISA Kit拉丁屬名: Fusarium avenaceum

木賊鐮孢PGM (Phosphoglucomutase) ELISA Kit拉丁屬名: Fusarium equiseti

空氣近藤氏酵母PCK1 (Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Kondoa aeria

玫瑰黃鏈霉菌PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit 用途: 產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性

運動節(jié)桿菌PLA1 (Phospholipase A1) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter  agilis

靈芝GLO1 (Glyoxalase I )ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

厭鹽假諾卡氏菌PLSCR1 (Phospholipid Scramblase 1) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudonocardia halophobica

大腸埃希菌PLSCR2 (Phospholipid Scramblase 2) ELISA Kit 拉丁屬名: coli

異常畢赤酵母PI3K2α (Phosphoinositide-3-Kinase Class-2-Alpha Polypeptide) ELISA Kit拉丁屬名: Pichia  anomala

蘇云金芽孢桿菌松球亞種GPC1 (Glypican 1) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希氏菌GPC2 (Glypican 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia  coli
脆弱擬桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 ER- Alpha/ER alpha peptide  雌激素受體α抗原綿馬貫眾素ABBADryocrassin中藥標(biāo)準品  分 子 式: C43H48O16 分 子 量:

ER- Beta (Estrogen receptor-beta) peptide  雌激素受體β抗原Western blot二抗稀釋液標(biāo)準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ets1/E26 (E-twenty six 1)  Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗原10-羥基喜樹堿(S)-4-Ethyl-4,9-dihydroxy-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H,12H)-dione中藥標(biāo)準品  分 子 式: C20H16N2O5 分 子 量: 364.35144

EV71(Human enterovirus 71)VP1  腸道病毒71型/病毒抗原長春胺Vincamine中藥標(biāo)準品  分 子 式: C21H26N2O3 分 子 量: 354.44

EV71(Human enterovirus 71)VP1(CT)  腸道病毒71型/病毒抗原(C端)維生素D2Vitamin D2維生素類 分 子 式: C28H44O 分 子 量: 396.65

ATEXPA10 peptide  植物擴張蛋白ATEXPA10（擬南芥）抗原刺桐堿1H-Indole-3-ethanaminium,a-carboxy-N,N,N-trimethyl-, innersalt, (aS)-中藥標(biāo)準品  分 子 式: C14H18N2O2 分 子 量: 246.30492

Ezrin/Radixin  埃茲蛋白（多肽）派立辛Parishin中藥標(biāo)準品  分 子 式: C32H40O19 分 子 量: 728.6486