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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

水極單胞菌Pg (Progesterone) ELISA Kit拉丁屬名: Polaromonas aquatica

鏈格孢PAQR7 (Progestin and AdipoQ Receptor Family Member VII) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌PGR (Progesterone Receptor) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

香蕉sCD44 (Soluble Cluster of Differentiation 44) ELISA Kit用途: 植物病原菌

密蘇里游動放線菌PS2 (Presenilin 2) ELISA Kit拉丁屬名: Actinoplanes   missouriensis

大腸埃希氏菌EGR1 (Early Growth Response Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia  coli

類干酪乳桿菌EGR2 (Early Growth Response Protein 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Lactobacillus  paracasei

管毛殼EGR3 (Early Growth Response Protein 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Chaetomium cuniculorum

鏈霉菌屬EGR4 (Early Growth Response Protein 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Streptomyces  sp.

淡紫紫霉NFYC (Nuclear Transcription Factor Y Gamma) ELISA Kit  拉丁屬名: Purpureocillium lilacinum

黃色直絲鏈霉菌MUC5AC (Mucin 5 Subtype AC) ELISA Kit用途: 代謝產(chǎn)物具有弱的活性。

黑木耳MUC5B (Mucin 5 Subtype B) ELISA Kit拉丁屬名: Auricularia  auricula

假單胞菌MUC7 (Mucin 7) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas meridiana

短小芽孢桿菌MEC/CCL28 (Mucosae Associated Epithelia Chemokine) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus pumilus

秦氏蜜環(huán)菌eIF3a (Eukaryotic Translation Initiation Factor 3a) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
伯氏疏螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格MIP2 (myocardial ischemic preconditioning upregulated protein 2)  巨噬細胞蛋白2抗原細葉遠志苷ATenuifoliside A中藥標準品  分 子 式: C31H38O17 分 子 量: 682.62322

MMP-13 (Matrix metalloproteinase 13)  基質(zhì)金屬蛋白酶13抗原絞股藍皂苷AGypenoside A中藥標準品  分 子 式:  分 子 量:

MMP-20(matrix metalloproteinase 20)  基質(zhì)金屬蛋白酶20抗原山奈酚-3-O-(2',6'-二-O-反式-對-香豆?；?-beta-D-吡喃葡萄糖苷3-O-kaempferol 2,6-di-O-(trans-p-coumaroyl)-beta-D-glucopyranoside化學(xué)標準品 分 子 式: C39H32O15 分 子 量: 740.662

MMP-17(Matrix metalloproteinase-17)  基質(zhì)金屬蛋白酶-17抗原Ent-3-氧代貝殼烯烷-16,17-二醇Kauran-3-one, 16,17-dihydroxy-, (16alpha)-對照藥材 分 子 式: C20H32O3 分 子 量: 320.46628

MMP-26(Matrix metalloproteinase-26)  基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗原胃蛋白酶抗原修復(fù)液標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MMP-9(matrix metalloproteinase 9)  基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗原桃柁酚2-Phenanthrenol,4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahydro-4b,8,8-trimethyl-1-(1-methylethyl)-, (4bS,8aS)-對照藥材 分 子 式: C20H30O 分 子 量: 286.4516

MMP-10(matrix metalloproteinase 10)  基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗原金合歡素5,7-Dihydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-4H-chromen-4-one中藥標準品  分 子 式: C16H12O5 分 子 量: 284.26348