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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數據分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

大腸埃希菌PKP1 (Plakophilin 1) ELISA Kit 拉丁屬名: coli

巨大芽孢桿菌PKP2 (Plakophilin 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

地衣芽胞桿菌ANGPTL8 (Angiopoietin Like Protein 8) ELISA Kit用途: 分類、研究，具有 固氮生物肥料潛力。

謝瓦曲霉PAC3 (Platelet Associated Complement 3) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus chevalieri

草假單胞菌PA-IgM (Platelet Associated Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas  graminis

弗氏鏈霉菌PAIg (Platelet Associated Immunoglobulins) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces fradiae

木菇屬PFKP (Phosphofructokinase, Platelet) ELISA Kit用途: 食用菌

瓜果腐霉PDGF (Platelet-Derived Growth Factor) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母PDGFC (Platelet Derived Growth Factor C) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

優(yōu)美氈被菌PDGFD (Platelet Derived Growth Factor D) ELISA Kit 拉丁屬名: Spongipellis delectans

黃色刺孢鏈霉菌PDGFRα (Platelet Derived Growth Factor Receptor Alpha) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces flavospinosporus

克羅諾桿菌屬PF4 (Platelet Factor 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Cronobacter sp.

嗜熱側孢霉PF4V1 (Platelet Factor 4 Variant 1) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

羅倫隱球酵母GYPE (Glycophorin E) ELISA Kit 拉丁屬名: Cryptococcus laurentii

開菲爾乳桿菌SSTR4 (Somatostatin Receptor 4) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  kefir
波氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格lamin A  核纖層蛋白A抗原白花前胡素EPraeruptorin E中藥標準品  分 子 式: C24H28O7 分 子 量: 428.47

LOX-1/OLR1  凝集素樣氧化型受體Acr-Bis(40%,19:1)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

LPLUNC1  人癌基因多肽抗原二甲苯青FF溶液(2.5%)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1)  淋巴管內皮透明質酸受體抗原亞硝酸鈉水溶液(1%)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ACE( ACE, testis-specific isoform precursor)  緊張素轉換酶(抗原)阿魏酸乙酯Ethyl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate中藥標準品  分 子 式: C12H14O4 分 子 量: 222.23716

Integrin alpha E2 peptide  整合素alpha E2抗原腺苷Adenosine中藥標準品  分 子 式: C10H13N5O4 分 子 量: 267.24132

Mac-1 (Mac-1/CR3/CD11b+CD18)  巨噬細胞表面分子抗原2-萘酚-8-磺酸鉀Potassium 7-hydroxynaphthalene-1-sulfonate化學標準品 分 子 式: C10H7O4S-.K+ 分 子 量: 262.32348