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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

纖維纖維微菌UBAP2 (Ubiquitin Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Cellulosimicrobium cellulans

冷溫木拉克酵母MASP1 (Mannan Associated Serine Protease 1) ELISA Kit拉丁屬名: Mrakia frigida

斯氏土地桿菌MASP2 (Mannan Associated Serine Protease 2) ELISA Kit拉丁屬名: Pedobacter steynii

大腸埃希氏菌USP8 (Ubiquitin Specific Peptidase 8) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

弗雷德里克斯堡假單胞菌DPP6 (Dipeptidyl Peptidase VI) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas frederiksbergensis

克魯斯假絲酵母MRC2 (Mannose Receptor C Type 2) ELISA Kit拉丁屬名: Candida  krusei

小殼焦孢屬MRC1 (Mannose Receptor C Type 1 ) ELISA Kit用途: 植物病原物；用于該類群菌的系統(tǒng)學研究

釀酒酵母MRC1 (Mannose Receptor C Type 1 Like Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

釀酒酵母GADL1 (Glutamate Decarboxylase Like Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

蠟狀芽孢桿菌GAD1 (Glutamate Decarboxylase 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  cereus

蘇云金芽孢桿菌PEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus thuringiensis Berliner

白僵菌PPAR-δ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Delta) ELISA Kit用途: 害蟲生物防治

喉病毒NUP62 (Nucleoporin 62kDa) ELISA Kit拉丁屬名: Infectious       laryngotracheitis virus

釀酒酵母PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

矩圓黑盤孢RANκ (Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
牛巨細胞病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨酸受體1（多肽）香草乙酮Acetovanillone中藥標準品  分 子 式: C9H10O3 分 子 量: 166.1739

NR1/NMDAR1/GLUR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨酸受體1抗原人參皂苷Rb2ginsenoside rb2中藥標準品  分 子 式: C53H90O22 分 子 量: 1079.27

NR1/NMDAR1  谷氨酸受體13-O-(2'E,4'Z-癸二烯?；?巨大戟二萜醇2,4-Decadienoic acid,(1aR,2R,5R,*S,6S,8aS,9R,10aR)-1a,2,5,*,6,9,10,10a-octahydro-5,*-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)-1,1,7,9-tetramethyl-11-oxo-1H-2,8a-methanocyclopenta[a]cyclopropa[e]cyclodecen-6-ylester, (2E,4Z)-化學標準品 分 子 式: C30H42O6 分 子 量:

NR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C)  谷氨酸受體2C（多肽）去甲氧基去乙酰氧基土槿甲酸 BDemethoxydeacetoxypseudolaric-acid-B對照藥材 分 子 式: C20H24O7 分 子 量: 376.40036

N-ras  原癌基因抗原5-(Z-十七-8-烯基)鄰苯二酚5-(Heptadec-8-en-1-yl)benzene-1,3-diol對照藥材 分 子 式: C23H38O2 分 子 量: 346.54662

Nrf2 peptide  核因子2相關(guān)因子2抗原抗體儲存液標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NRF-1(nuclear respiratory factor-1)  核呼吸因子-1抗原新西蘭牡荊苷Vicenin-2中藥標準品  分 子 式: C27H30O15 分 子 量: 594.52