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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

AST (Aspartate Aminotransferase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

亮白曲霉ATM (Ataxia Telangiectasia Mutated) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

烏克蘭毛霉ATXN1 (Ataxin 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Mucor ucrainicus

短柄帚霉ATXN2 (Ataxin 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Scopulariopsis brevicaulis

鼠李糖乳桿菌ABCA1 (ATP Binding Cassette Transporter A1) ELISA Kit 拉丁屬名: Lactobacillus  rhamnosus

產(chǎn)氣腸桿菌*ABCG1 (ATP Binding Cassette Transporter G1) ELISA Kit 拉丁屬名: Enterobacter  cloacae

新疆鹽單胞菌ANP (Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit 拉丁屬名: Halomonas xinjiangensis

禾谷鐮孢菌AXIN2 (Axis Inhibition Protein 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Fusarium graminearum Schwabe

總狀共頭霉bFGF/FGF2 (Basic Fibroblast Growth Factor) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大孢聯(lián)軛霉FGF4 (Fibroblast Growth Factor 4) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黑曲霉FGF6 (Fibroblast Growth Factor 6) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  niger

圍小叢殼BAFFR (B-Cell Activation Factor Receptor) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

蠟樣芽胞桿菌Bcl-2 (B-Cell Leukemia/Lymphoma 2) ELISA Kit 用途: 分類、研究，具有處理富營養(yǎng)水體和養(yǎng)殖廢水潛力。

博斯氏菌屬Bcl-3 (B-Cell CLL/Lymphoma 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Bosea  lathyri

葉球形微桿菌BAK1 (BCL2 Antagonist/Killer 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Microbacterium phyllosphaerae
田鼠布魯氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Sox2  胚胎干細胞關(guān)鍵蛋白改良臺氏液(無鈣)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TSFP1/SP1(transcription factor Sp1)  SP1轉(zhuǎn)錄生長因子抗原酸性乙醇分化液(1%)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine)  富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白抗原山梨醇-磷酸鹽溶液(1.2mol/L,pH7.5)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SRF(Serum response factor)  血清應(yīng)答因子抗原甲基橙皮苷查爾酮Hesperidin methylchalcone中藥標準品  分 子 式: C29H36O15 分 子 量: 624.58714

SREBP-1(Sterol Regulatory Element Binding Protein-1)  固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗原白楊素Chrysin中藥標準品  分 子 式: C15H10O4 分 子 量: 254.24

AKAP12A/SSeCKS peptide  絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗原硫酸黃連堿Coptisine Sulfate中藥標準品  分 子 式: C15H10NO4+.O3S-2 分 子 量: 348.3074

Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1)  階段特異性胚胎表面抗原-1抗原鄰苯二甲酸二辛酯Dioctyl phthalate對照藥材 分 子 式: C24H38O4 分 子 量: 390.55612