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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

云芝栓孔菌 (變色栓菌)GCP-2 (Granulocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Trametes versicolor

假單胞菌G-CSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

羅伊氏乳桿菌Gzms-A (Granzymes A) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  reuteri

大斑凸臍蠕孢Gzms-B( Granzymes B) ELISA Kit拉丁屬名: Exserohilum turcicum

喜乳糖擬泡囊擔(dān)孢酵母GREM1 (GremLin 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Cystobasidiopsis lactophilus

谷氨酸棒桿菌Ⅲ型GDF1 (Growth Differentiation Factor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Corynebacterium  glutamicum

大腸埃希菌GDF2 (Growth Differentiation Factor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: coli

黑附球菌GDF3 (Growth Differentiation Factor 3) ELISA Kit拉丁屬名: Epicoccum nigrum Link

無花果曲霉GDF5 (Growth Differentiation Factor 5) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  ficuum

銹赤蠟黃鏈霉菌GDF9 (Growth Differentiation Factor 9) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces rubiginosohelvolus

膜醭假絲酵母GDF11 (Growth Differentiation Factor 11) ELISA Kit拉丁屬名: Candida membranifaciens

堿線菌屬GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit 拉丁屬名: Natrinema  sp

Rhizobium multihospitium GRB10 (Growth Factor Receptor Bound Protein 10) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

甘蔗生節(jié)棱孢GRB14 (Growth Factor Receptor Bound Protein 14) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrinium saccharicola

根瘤菌GRB2 (Growth Factor Receptor Bound Protein 2) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用
鴿病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒 Hepatitis C Virus RNA-directed RNA polymerase  病毒NS4B（65kDa）抗體羧芐青霉素溶液(Carbenicillin,50mg/ml)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SORBS2/ArgBP2  精氨酸結(jié)合蛋白2抗體β-蒎烯(1S,5S)-6,6-Dimethyl-2-methylenebicyclo[3.1.1]heptane化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C10H16 分 子 量: 136.23404

BNP  腦鈉素/利鈉肽抗體洋紫蘇醇B1H-Naphtho[2,1-b]pyran-1-one,6-(acetyloxy)-3-ethenyldodecahydro-5,10,10b-trihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-,(3R,4aR,5S,6S,6aS,10S,10aR,10bS)-對(duì)照藥材 分 子 式: C22H34O7 分 子 量: 410.50116

p70 S6 kinase beta  核糖體蛋白S6激酶1抗體酒石酸長春質(zhì)堿化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

CD20  CD20抗體原蘇木素B(7S)-3,7,10,11-Tetrahydroxy-7,8-dihydro-6H-dibenzo[b,d]oxocin-7-methanol中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C16H16O6 分 子 量: 304.29464

Complement C3 beta chain  補(bǔ)體C3b抗體土克甾酮Cholest-7-en-6-one,2,3,11,14,20,22,25- heptahydroxy-,(2a,3a,5a,11R,22R)- 中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C27H44O8 分 子 量: 496.63346

C3a/C3a anaphylatoxin  補(bǔ)體C3a過敏毒素抗體氯化錦葵色素-3-O-半乳糖苷1-Benzopyrylium, 3-(b-D-galactopyranosyloxy)-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-,chloride (1:1)化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C23H25O12+.Cl- 分 子 量: 528.8904