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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

閃光須霉DHEA-S (Dehydroepiandrosterone Sulfate) ELISA Kit 拉丁屬名: Phycomyces nitens

金灰青霉LDHB (Lactate Dehydrogenase B) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium aurantiogriseum

紅曲紅曲D-LDH (D-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 拉丁屬名: Monascus  anka

分枝卷霉ASB (Arylsulfatase B) ELISA Kit拉丁屬名: Circinella ramosa

溶藻弧菌TPA (Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Vibrio  alginolyticus

豇豆慢生根瘤菌FcαR/CD89 (Receptor I for the Fc Fragment of IgA) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

豬鏈球菌TMSβ4 (Thymosin Beta 4) ELISA Kit 拉丁屬名: suis

成團泛菌PTGES2 (Prostaglandin E Synthase 2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

孟氏假單胞菌NA/NE (Noradrenaline) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas  mandelii

屎腸球菌ON (Osteonectin) ELISA Kit 拉丁屬名: Enterococcus  faecium

硬桿菌TUBα3C (Tubulin Alpha 3c ) ELISA Kit 拉丁屬名: Arthrobacter     scleromae

Massilia duraCYSLTR2 (Cysteinyl Leukotriene Receptor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Massilia dura

宇佐美曲霉FGFR4 (Fibroblast Growth Factor Receptor 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  usamii

中慢生華癸根瘤菌PROC (Protein C) ELISA Kit用途: 與膜莢黃芪、沙打旺共生固氮

島生坂野酵母PICP (Procollagen I C-terminal Propeptide) ELISA Kit 拉丁屬名: Bannoa hahajimensis
蝦肝腸微胞蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書NESG1/CCDC19  鼻咽上皮細胞特異性蛋白1抗體延命草素Enmein化學標準品 分 子 式: C20H26O6 分 子 量: 362.41684

FOXL2  小瞼裂綜合征蛋白BPES抗體桑根酮KSanggenon K化學標準品 分 子 式: C30H32O6 分 子 量: 488.571

XPC  DNA補充修復XPC細胞蛋白抗體鞭打繡球甙 Ab-D-Glucopyranoside,2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)ethyl 3-O-b-D-glucopyranosyl-,4-[(2E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-propenoate] (9CI)對照藥材 分 子 式: C31H40O16 分 子 量:

EPHA10  酪氨酸蛋白激酶受體A10抗體仙鶴草內(nèi)酯1H-2-Benzopyran-1-one,3,4-dihydro-6,8-dihydroxy-3-[2-(4-methoxyphenyl)ethyl]-, (3S)-對照藥材 分 子 式: C18H18O5 分 子 量: 314.33252

TP53I8/EI24  蛋白p53誘導蛋白8過氧去氫土莫酸(20xi)-3beta,16alpha-dihydroxy-*lpha,8alpha-epidioxy-24-methyllanosta-6,9(11),24(241)-trien-21-oic acid化學標準品 分 子 式: C31H46O6 分 子 量: 514.693

EVC2  膜蛋白EVC2抗體Tris-HCl緩沖液(1mol/L,pH7.5)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

BMPR1B  骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B抗體戈米辛D5,13-(Epoxybutanoxy)benzo[3,4]cycloocta[1,2-f][1,3]benzodioxol-18-one,5,6,7,8-tetrahydro-6,17-dihydroxy-1,2,3-trimethoxy-6,7,16,17-tetramethyl-,(5S,6S,7S,13aR,16R,17R)-中藥標準品  分 子 式: C28H34O10 分 子 量: 530.56356