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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

金黃殼囊孢PLCβ1/PI-PLC (Phospholipase C Beta 1, Phosphoinositide Specific) ELISA Kit拉丁屬名: Cytospora chrysosperma

暗孢毛殼TERT (Telomerase Reverse Transcriptase) ELISA Kit拉丁屬名: Chaetomium atrosporum

白黑鏈霉菌PDI (Protein Disulfide Isomerase) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces alboniger

灰樹花MGST1 (Microsomal Glutathione S Transferase 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Grifola  frondosa

植物乳桿菌CALD (Caldesmon) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  plantarum

沼澤紅假單胞菌NRG-1 (Neuregulin 1) ELISA Kit用途: 用于微生物肥料，水產(chǎn)養(yǎng)殖，污水處理

枯草芽孢桿菌GDF5 (Growth Differentiation Factor 5) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  subtilis

不動桿菌NOX1 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Acinetobacter sp.

ArthrobacterNPYR5 (Neuropeptide Y Receptor Y5) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter phenanthrenivorans

德氏乳桿菌保加利亞亞種LOXL4 (Lysyl Oxidase Like Protein 4 ) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  delbrueckii subsp. bulgaricus

黃桿菌SDF-4 (Stromal Cell Derived Factor 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Flavobacterium beibuense

新城疫病毒CCL1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit拉丁屬名: Newcastle       disease virus

枯草芽孢桿菌TTN (Titin) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

沙阿霉素鏈霉菌ADMA (Asymmetrical Dimethylarginine) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces zaomyceticus

棲沙鹽水孢菌GATA4 (GATA Binding Protein 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Salinispora arenicola
性大腸桿菌O157血清型探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格ADA/Adenosine deaminase  腺苷脫氨酶抗體PBS-BSA溶液(含鈣鎂,1%BSA)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Cryopyrin/CIAS1/NALP3  細胞凋亡誘導(dǎo)蛋白NALP3抗體紫杉醇CTAXOL C(P) 中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C46H57NO14 分 子 量: 847.943080000001

Cyclin B2  周期素B2抗體2,4,6,6-四甲基-3(6H)-吡啶酮2,4,6,6-Tetramethylpyridin-3(6H)-one對照藥材 分 子 式: C9H13NO 分 子 量: 151.20562

PRX/periaxin  軸周蛋白PRX抗體福爾馬林-硫酸鋅固定液(10%)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Calumenin/CALU  鈣腔蛋白三乙酸柚皮素酯2-(4-Acetoxyphenyl)-4-oxochroman-5,7-diyl diacetate對照藥材 分 子 式: C21H18O8 分 子 量: 398.36282

CD98  CD98重鏈抗原抗體DNA保存液標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Emerin  Emerin蛋白抗體4',6-二甲基-2-羥基苯乙酮1-(2-Hydroxy-4,6-dimethoxyphenyl)ethanone對照藥材 分 子 式: C10H12O4 分 子 量: 196.19988