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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

新疆鹽地桿菌NRIP1 (Nuclear Receptor Interacting Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Salinibacterium     xinjiangense

短桿狀馬賽菌c-myc (c-myc Oncogene Product) ELISA Kit拉丁屬名: Massilia brevitalea

博斯氏菌屬Aβ1-42 (Amyloid Beta Peptide 1-42) ELISA Kit拉丁屬名: Bosea lathyri

戊糖片球菌CD109 (Cluster of Differentiation 109) ELISA Kit 拉丁屬名: Pediococcus  pentosaceus

短小芽胞桿菌CDK2 (Cyclin Dependent Kinase 2) ELISA Kit用途: 分類 研究

枯草芽孢桿菌MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

勒仔樹根瘤菌CPP (Copeptin) ELISA Kit用途: 固氮。

微桿菌屬AT (AntiThrombin) ELISA Kit拉丁屬名: Microbacterium  hatanonis

米曲霉α Manase (α Mannosidase) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus oryzae

ChryseobacteriumDAG1 (Dystrophin Associated Glycoprotein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Chryseobacterium hispanicum

油菜假單胞菌SYNPO (Synaptopodin) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas brassicacearum

產(chǎn)朊假絲酵母ALDOC (Aldolase C, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit拉丁屬名: Candida  utilis

黑曲霉EREG (Epiregulin) ELISA Kit用途: 降解PAH、菲等。

弗蘭克氏菌IGF2R (Insulin Like Growth Factor 2 Receptor) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

灰葡萄孢（灰霉病菌）8-epi-PGF2α (8-Epi-Prostaglandin F2 Alpha) ELISA Kit用途: 教學科研
馬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒供應商MST4  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MST4抗體野黑櫻苷Benzeneacetonitrile, a-(b-D-glucopyranosyloxy)-, (aR)-對照藥材 分 子 式: C14H17NO6 分 子 量: 295.28788

MAP3K14/NFkB Inducing Kinase NIK  絲裂原活化蛋白激酶3K14抗體阿魏酸松柏酯3-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)allyl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate中藥標準品  分 子 式: C20H20O6 分 子 量: 356.3692

Cullin 5/CUL5  加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體丹參新醌D7H-Phenanthro[3,2-b]pyran-7,12(8H)-dione,9,10-dihydro-8-(hydroxymethyl)-4,8,9-trimethyl-化學標準品 分 子 式: C21H20O4 分 子 量: 336.3811

AQP8/Aquaporin 8  水通道蛋白8抗體左旋哈氏豆屬酸1-Naphthalenecarboxylic acid, 5-(2-(3-furanyl)ethyl)-3,4,4a,5,6,7,8,8a-octahydro-5,6,8a-trimethyl-, (4aR-(4aalpha,*lpha,6beta,8abeta))-對照藥材 分 子 式: C20H28O3 分 子 量: 316.43452

SLC26A4  鈉碘單獨轉(zhuǎn)運蛋白SLC26A4抗體絲石竹皂苷元3-O-B-D葡萄糖醛酸甲酯gypsogenin-3-O-glucuronide中藥標準品  分 子 式: C36H54O10 分 子 量: 646.80796

Granzyme K  顆粒酶K抗體降二氫辣椒堿Octanamide,N-[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl]-7-methyl-中藥標準品  分 子 式: C17H27NO3 分 子 量: 293.40118

SRGN/Chondroitin sulfate proteoglycan core protein  硫酸軟骨素多糖核心蛋白抗體原花青素C1[4,8':4',8''-Ter-2H-1-benzopyran]-3,3',3'',5,5',5'',7,7',7''-nonol,2,2',2''-tris(3,4-dihydroxyphenyl)-3,3',3'',4,4',4''-hexahydro-,(2R,2'R,2''R,3R,3'R,3''R,4R,4'S)-化學標準品 分 子 式: C45H38O18 分 子 量: 866.772420000001