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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

LuteolibacterApoC3 (Apolipoprotein C3) ELISA Kit拉丁屬名: Luteolibacter  cuticulihirudinis

小葉相思根瘤菌ANG II (Angiotensin II) ELISA Kit用途: 固氮。

類諾卡氏菌屬GTEAGE (Glomerular Tissue Extract Advanced Glycosylation End Products) ELISA Kit拉丁屬名: Nocardioides  kribbensis

梭菌屬NAGase (N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) ELISA Kit 拉丁屬名: Clostridium sp.

蘇云金芽胞桿菌亞毒亞種ADAM10 (A Disintegrin And Metalloprotease 10) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

叢毛紅曲DNase-I (Deoxyribonuclease I) ELISA Kit拉丁屬名: Monascus  pilosus

東方伊薩酵母COL3 (Collagen Type Ⅲ) ELISA Kit拉丁屬名: Issatchenkia orientalis

釀酒酵母mTOR (Mammalian Target of Rapamycin) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

蠟樣芽孢桿菌δSIP-α (Delta Sleep Inducing Peptide α) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  cereus

 禽病毒MASP1 (Mannan Associated Serine Protease 1) ELISA Kit拉丁屬名: Avian leucosis virus

淡紫青霉C/EBPδ (CCAAT/Enhancer Binding Protein, Delta) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium lilacinum Thom

印度芽孢桿菌CNP (C-type Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus indicus

洋蔥伯克霍爾德氏菌PHLDA2 (Pleckstrin Homology Like Domain Family A, Member 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Burkholderia cepacia

絨毛栓菌MUC5B (Mucin 5 Subtype B) ELISA Kit拉丁屬名: Trametes pubescens

酮丁梭菌COL15 (Collagen Type XV) ELISA Kit 拉丁屬名: Clostridium  acetobutylicum
串珠鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格BAI2/Brain Specific Angiogenesis Inhibitor 2  腦特異性生成抑制蛋白2抗體雪膽素甲19-Norlanosta-1,5-diene-3,11,22-trione, 16,24-epoxy-2,25-dihydroxy-9-methyl-, (9beta,10alpha,16alpha,24S)-中藥標準品  分 子 式: C30H42O6 分 子 量: 498.65088

KLHL20  Kelch樣蛋白20抗體開環(huán)異落葉松樹脂酚Secoisolariciresinol中藥標準品  分 子 式: C20H26O6 分 子 量: 362.41684

LECT1  白細胞衍生化學吸引素抗體羅漢果皂苷IVab-D-Glucopyranoside, (3b,9b,10a,11a,24R)-11,25-dihydroxy-9-methyl-19-norlanost-5-ene-3, 24-diyl bis[6-O-b-D-glucopyranosyl-中藥標準品  分 子 式: C54H92O24 分 子 量: 1125.29388

Natriuretic Peptide Receptor A  利鈉肽受體A抗體連翹酯苷H化學標準品 分 子 式:  分 子 量:

Ribonuclease Inhibitor  核糖核酸酶抑制因子1抗體戈米辛HDibenzo[a,c]cyclooctene-1,7-diol,5,6,7,8-tetrahydro-2,3,10,11,12-pentamethoxy-6,7-dimethyl-, (6S,7S,12aR)-化學標準品 分 子 式: C23H30O7 分 子 量:

SEMA4A  跨膜蛋白SEMA4A抗體柴胡皂苷B1Saikosaponin B1中藥標準品  分 子 式: C42H68O13 分 子 量: 780.99

SPON1/F spondin  細胞外基質(zhì)底物反應蛋白1抗體乙酸鈉溶液(3mol/L,pH5.6,RNase free)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: