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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

少根根霉GDH/GLDH (Glutamate dehydrogenase) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus arrhizus var. arrhizus

蟲草MAdCAM1 (Mucosal Addressin Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黃曲霉SEMA7A (Semaphorin 7A) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  flavus

松果鏈霉菌ETRB (Endothelin Receptor B) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces carpinensis

黑馬朗假絲酵母IL-11 (Interleukin 11) ELISA Kit拉丁屬名: Candida haemulonii

大腸埃希氏菌LAB7-2/CD86 (B-Lymphocyte Activation Antigen B7-2) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

間型假絲酵母MYBPC3 (Myosin Binding Protein C, Cardiac) ELISA Kit拉丁屬名: Candida intermedia

雷丸菌Surv (Survivin) ELISA Kit拉丁屬名: Laccocephalum mylittae

蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種UBE2C (Ubiquitin Conjugating Enzyme E2C) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus thuringiensis subsp. galleriae

枯草芽孢桿菌MRC2 (Mannose Receptor C Type 2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

石楠炭疽病菌F9 (Coagulation Factor Ⅸ) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

白假絲酵母STAT4 (Signal Transducer and Activator of Transcription 4) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

蠟樣芽胞桿菌MAPK (Mitogen Activated Protein Kinase) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus cereus

黑曲霉TEP1 (Telomerase Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  niger

三葉草根瘤菌OTF2B (Octamer Transcription Factor 2B) ELISA Kit用途: 與三葉草共生固氮
弗朗西斯菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格Adenylate Kinase 1/AK1  腺苷酸激酶-1抗體鹽酸胍溶液(8mol/L)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CTNNBIP1  β鏈接素相互作用蛋白1抗體滇烏頭堿yunaconitine化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C35H49NO11 分 子 量: 659.768

phospho-CTNNBIP1 (Ser36)  磷酸化β鏈接素相互作用蛋白1抗體大麻酰胺D2,3-Naphthalenedicarboxamide,1,2-dihydro-7-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-N2,N3-bis[2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]-6-methoxy-,(1R,2S)-rel-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C36H36N2O8 分 子 量:

phospho-CTNNBIP1 (Thr43/Ser50)  磷酸化β鏈接素相互作用蛋白1抗體西紅花苷IITricrocin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C37H52O19 分 子 量: 800.797380000001

AKR1D1  醛固酮還原酶家族1成員D1抗體檸檬苦素limonin from citrus seeds中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C26H30O8 分 子 量: 470.52

ALDH1B1  乙醛脫氫酶5抗體酚酞溶液標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ALDOB  醛縮酶2抗體聚谷氨酸紫杉醇CT-2103中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C47H51NO14.C5H9NO4 分 子 量: 1001.0354