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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

枯草芽孢桿菌CX37 (Connexin 37) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

耶納農(nóng)球菌VLDLR (Very Low Density Lipoprotein Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Agrococcus jenensis

中慢生華癸根瘤菌bTC (Betacellulin) ELISA Kit 用途: 與紫云英共生結(jié)瘤固氮

黑曲霉PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus niger

近平滑假絲酵母PDH E1 (Pyruvate Dehydrogenase E1) ELISA Kit拉丁屬名: Candida parapsilosis

白靈側(cè)耳（白靈菇）AQP-4 (Aquaporin 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Pleurotus  nebrodensis

光滑鏈霉菌SFRP2 (Secreted Frizzled Related Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces levis

土曲霉α-SCA (α-sarcomeric Actin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

球孢枝孢Hepc (Hepcidin) ELISA Kit 拉丁屬名: Cladosporium sphaerospermum Penz.

海濱適鹽菌PAR4 (Protease Activated Receptor 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Haladaptatus litoreus

秦氏蜜環(huán)菌CD40L/TNFSF5 (Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌SPA (Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  subtilis

斑污擬盤多孔孢β-Lg (β-Lactoglobulin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

小孢根霉華變種CXCR1 (CXC-Chemokine Receptor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus microsporus var. chinensis

枯草芽孢桿菌RBP4 (Retinol Binding Protein 4, Plasma) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis
蓋塔病毒探針法熒光定量RT-探針法熒光定量PCR試劑盒說明書B3GALNT1  β1，3半乳糖轉(zhuǎn)移酶3抗體格蘭地新groenlandicine中藥標準品  分 子 式: C19H16NO4+ 分 子 量: 322.33464

Blood Group Lewis a  血型抗原Lewis A抗體Sorensen磷酸緩沖液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Cyclophilin F  親環(huán)蛋白（親環(huán)素）PPIF抗體甲基新苦木素16-beta-O-Methylneoquassin化學標準品 分 子 式: C23H32O6 分 子 量: 404.497

DAP3  死亡相關(guān)蛋白3抗體獐牙菜苦苷Swertiamarin中藥標準品  分 子 式: C16H22O10 分 子 量: 374.34

HAX1  造血干細胞特異性相關(guān)結(jié)合蛋白1抗體毛果香茶菜醛 ASpiro[cyclohexane-1,4'(3'H)-[1H-7,9a]methanocyclohepta[c]pyran]-2-carboxaldehyde,hexahydro-5'-hydroxy-3,3-dimethyl-8'-methylene-1',9'-dioxo-,(1R,2R,4'aS,5'R,7'S,9'aS)-對照藥材 分 子 式: C20H26O5 分 子 量: 346.41744

NS5ATP9/KIAA0101  病毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體鹽酸乙醇胺溶液(1mol/L,pH8.0)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MFF  線粒體裂變因子MFF抗體無菌去離子水(For Cell Culture)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: