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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

香菇Monkey PUMA (P53 Upregulated Modulator of Apoptosis) ELISA Kit拉丁屬名: Lentinula edodes

草酸青霉Monkey Sp100 (Sp100 Nuclear Antigen) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium oxalicum

假單胞菌屬Monkey HSP-90 (Heat Shock Protein 90) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas arsenicoxydans

果生鏈核盤菌Monkey ECFR (Eosinophil Chemotactic Factor Receptor) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

三棱孢小囊菌Monkey fT4 (Free Thyroxine) ELISA Kit拉丁屬名: Microascus trigonosporus

米氏假單胞菌Monkey Bcl-10 (B-cell Leukemia/Lymphoma 10) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas   migulae

解淀粉周培瑾氏菌Monkey RANκ (Receptor Activator of  Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit拉丁屬名: Zhouia amylolytica

皺曲毛殼Monkey ADCY4 (Adenylate Cyclase 4) ELISA Kit拉丁屬名: Chaetomium crispatum

鼠乳桿菌Monkey FcγR II/CD32 (Receptor II for the Fc Fragment of IgG) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus murinus

釀酒酵母Monkey PADI4 (Peptidyl Arginine Deiminase Type IV) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

釀酒酵母Monkey AhR (Aryl Hydrocarbon Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

福氏志賀氏菌Monkey CSF3/GCSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

蠟狀芽孢桿菌Monkey CCND2 (Cyclin-D2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

細極鏈格孢Monkey LBP (Lipopolysaccharide Binding Protein) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

美澳型核果褐腐病菌Monkey PTH (Parathyroid Hormone) ELISA Kit拉丁屬名: Monilinia fructicola
病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒 CDC2L5  細胞分裂周期2樣蛋白激酶5抗體氯化錦葵色素-3-O-葡萄糖苷1-Benzopyrylium, 3-(b-D-glucopyranosyloxy)-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-,chloride (1:1)化學標準品 分 子 式: C23H25O12+.Cl- 分 子 量: 528.8904

PICK1  蛋白激酶Cα相互作用蛋白1抗體梓醇Catalpol中藥標準品  分 子 式: C15H22O10 分 子 量: 362.33

INCA1  INCA1蛋白抗體鼠尾草酚酮9H-Cyclohepta[a]naphthalen-9-one,1,2,3,4-tetrahydro-10-hydroxy-4,4,8-trimethyl-化學標準品 分 子 式: C18H20O2 分 子 量:

MS4A3/CD20L  CD20樣蛋白抗體（造血干細胞4跨膜蛋白3）甜菊雙糖苷STEVIOLBIOSIDE STANDARD中藥標準品  分 子 式: C32H50O13 分 子 量: 642.7316

Amylin  相關肽/胰島淀粉樣肽抗體Earle's平衡鹽溶液(1×EBSS,無鈣鎂糖酚紅)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SPDYA  細胞周期G2/M期快速誘導蛋白SPDYA抗體莫諾苯宗4-Benzyloxyphenol中藥標準品  分 子 式: C13H12O2 分 子 量: 200.23318

phospho-FRS2(Tyr436)  磷酸化成纖維細胞生長因子受體底物2抗體1-羥基-2-甲基蒽醌9,10-Anthracenedione,1-hydroxy-2-methyl-化學標準品 分 子 式: C15H10O3 分 子 量: 238.2381