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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

異常漢遜酵母ABCG2 (ATP Binding Cassette Transporter G2) ELISA Kit 拉丁屬名: Hansenula  anomala

巨大芽胞桿菌NPHN (Nephrin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

秦氏蜜環(huán)菌OXA (Orexin A) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黃孢平革菌AR (Androgen Receptor) ELISA Kit用途: 產(chǎn)胞外NADH過氧化物酶(produces extracellular NADH-oxidizing peroxidase) 合成及降解3、4-二甲氧苯甲基乙(synthesis and degradation of veratryl alcohol ) 轉(zhuǎn)變甘油三硝酸酯為一硝酸酯(converts glyceryl trinitrate to glyceryl 2-mononitrate) 降解2,4,5-T (degrades 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid (2

假根蘑菇AQP-2 (Aquaporin 2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽胞桿菌MAP-2 (Microtubule Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌NUP50 (Nucleoporin 50kDa) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌Bcl2L11 (Bcl-2 Like Protein 11) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

相思根瘤菌MAG Ab (Anti-Myelin Associated Glycoprotein Antibody) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌OBTF1 (Octamer Binding Transcription Factor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

大腸埃希菌PYY (Peptide YY) ELISA Kit拉丁屬名: coli

產(chǎn)氣莢膜梭菌       毒素C型NT-4 (Neurotrophin 4) ELISA Kit 拉丁屬名: perfringens       Type C

韌革菌屬OCLN (Occludin) ELISA Kit  拉丁屬名: Stereum sp.

Lysinibacillu xylanilyticusPCDHγA2 (Protocadherin Gamma A2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

陰溝腸桿菌ACA-IgM (Anti-Cardiolipin Antibody IgM) ELISA Kit拉丁屬名: Enterobacter cloacae subsp. cloacae
溶血性曼氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒供應(yīng)商YES1  原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體蒿草酚A[3,4'-Bibenzofuran]-6,6'-diol,3'-(3,5-dihydroxyphenyl)-4-[(2S,3S,4R,5S)-4-(3,5-dihydroxyphenyl)tetrahydro-2,5-bis(4-hydroxyphenyl)-3-furanyl]-2,2',3,3'-tetrahydro-2,2'-bis(4-hydroxyphenyl)-,(2S,2'R,3S,3'R)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C56H44O13 分 子 量: 924.940760000001

phospho-YES1(Tyr426)  磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體托品醇異丁酯Propanoic acid,2-methyl-, (3-endo)-8-methyl-8-azabicyclo[3.2.1]oct-3-yl ester化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C12H21NO2 分 子 量: 211.30064

phospho-YES1(Tyr537)  磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體柳杉酚； 10-脫氧代黃檜醇9(1H)-Phenanthrenone,2,3,4,4a,10,10a-hexahydro-6-hydroxy-1,1,4a-trimethyl-7-(1-methylethyl)-,(4aS,10aS)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C20H28O2 分 子 量: 300.43512

Anthrax  炭疽桿菌抗體棕櫚酸乙酯Ethyl palmitate中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C18H36O2 分 子 量: 284.47724

Anthrax  炭疽菌抗體（采用活疫苗制備）(24Z)-3,4-開環(huán)甘遂-4(28),7,24-三烯-3,26-二酸3,4-Secotirucalla-4(28),7,24-triene-3,26-dioic acid化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

SARM1  SARM1蛋白抗體牡荊素葡萄糖苷Glucosyl-vitexin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C27H30O16 分 子 量: 610.5175

SAMD9  SAMD9蛋白抗體8-氧黃連堿2,3,9,10-dimethylenedioxy-8-oxoprotoberberine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C19H13NO5 分 子 量: 335.31