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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

孟氏假單胞菌CFD (Complement Factor D) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas  mandelii

產(chǎn)黃青霉PHLDA2 (Pleckstrin Homology Like Domain Family A, Member 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium chrysogenum

串珠鐮孢TUBα3C (Tubulin Alpha 3c )ELISA Kit 用途: 產(chǎn)赤霉素

鏈霉菌ACTg1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit用途: 產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性

毛栓孔菌TSGF (Tumor Specific Growth Facter/Tumor Supplied Group of Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Trametes hirsuta

濟(jì)州極單胞菌PRDX5 (Peroxiredoxin 5) ELISA Kit拉丁屬名: Polaromonas  jejuensis

傘枝犁頭霉CSTA (Cystatin A)  ELISA Kit 拉丁屬名: Absidia corymbifera

單孢共頭霉多重生變種CYPD (Cyclophilin D) ELISA Kit 拉丁屬名: Syncephalastrum monosporum var. pluriproliferum

刺孢吸水鏈霉菌APSA (Anti-Phosphatidyl Serine Antibody) ELISA Kit用途: 產(chǎn)正放線酮

鼠李糖乳桿菌TREM-1 (Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells-1) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  rhamnosus

林生地霉SOX2 (Sex Determining Region Y Box Protein 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Geotrichum silvicola

凍土毛霉BLNK (B-Cell Linker Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor hiemalis

香菇GUK1 (Guanylate Kinase 1) ELISA Kit拉丁屬名: Lentinula edodes

單色云芝ADIPOR1 (Adiponectin Receptor 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

Pedobacter sp.CRHBP (Corticotropin Releasing Hormone Bingding Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Pedobacter sp.
曼氏桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格DPP6  二肽基肽酶6抗體千金藤素Cepharanthine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C37H38N2O6 分 子 量: 606.72

EFHA1  EFHA1蛋白抗體常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色洗脫液標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SENP1  小泛素相關(guān)修飾蛋白1抗體富馬酸fumaric acid中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C4H4O4 分 子 量: 116.07216

EFHC1  EFHC1蛋白抗體細(xì)胞核蛋白提取試劑盒標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

EFHC2  EFHC2蛋白抗體PLP固定液標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

EFHD1  EFHD1蛋白抗體氯化天竺葵素-3,5-O-雙葡萄糖苷PELARGONIN CHLORIDE化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C27H31O15+ 分 子 量: 595.52604

EF-CBP2  突觸結(jié)合蛋白2抗體馬兜鈴內(nèi)酰胺Benzo[f]-1,3-benzodioxolo[6,5,4-cd]indol-5(6H)-one,8-methoxy-中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C17H11NO4 分 子 量: 293.27354