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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

枯草芽孢桿菌EP2 (Prostaglandin E Receptor 2 ) ELISA Kit  拉丁屬名: Bacillus  subtilis

釀酒酵母FSHR (Follicle Stimulating Hormone Receptor) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

立枯絲核菌SMN1(Survival of Motor Neuron 1, Telomeric) ELISA Kit 用途: 進行分析檢測及抗病性鑒定，指導 。

韓國靈芝α-Glu (Alpha Glucosidase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

玫瑰栗色鏈霉菌ELN (Elastin) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces  roseocastaneus

側(cè)耳屬SPA (Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

桿狀毛霉GKN2 (Gastrokine 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Mucor bacilliformis

囊軸發(fā)仙菌囊軸亞種Surv (Survivin) ELISA Kit拉丁屬名: Pilimelia columellifera subsp. columellifera

微菌核鏈霉菌IκBβ (Inhibitory Subunit of NF Kappa B Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Streptomyces minutiscleroticus

須芒草伯克霍爾德氏菌PKR2 (Prokineticin Receptor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Burkholderia andropogonis

樣品粉碎機CTLA4 (Cytotoxic T Lymphocyte Associated Antigen 4) ELISA Kit規(guī)格: 便攜式

產(chǎn)紫青霉sCKR (Soluble Cytokine Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium purpurogenum

大腸埃希菌HSF2 (Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: coli

蘑菇β-CTx (Beta Crosslaps) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

Burkholderia anthinaFGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit用途: 固氮。
石膏樣小孢子菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Tankyrase  端粒調(diào)控因子抗體地黃苦苷1-Cyclohexene-1-carboxylicacid, 3-(b-D-glucopyranosyloxy)-2,6,6-trimethyl-,(3R)-化學標準品 分 子 式: C16H26O8 分 子 量:

ART5  二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶5抗體黃曲霉毒素G11H,12H-Furo[3',2':4,5]furo[2,3-h]pyrano[3,4-c][1]benzopyran-1,12-dione,3,4,7a,10a-tetrahydro-5-methoxy-, (7aR,10aS)-化學標準品 分 子 式: C17H12O7 分 子 量: 328.27298

ASB13  含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族13抗體乙醇溶液(75%)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ASC2/POP1  感染性蛋白*蛋白1抗體DL-谷氨酸DL-Glutamic acid氨基酸類 分 子 式: C5H9NO4 分 子 量: 147.12926

ATAD3A/B/C  三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體5-羥基-7-乙酰氧基黃酮5-Hydroxy-4-oxo-2-phenyl-4H-chromen-7-yl acetate對照藥材 分 子 式: C17H12O5 分 子 量: 296.27418

MAP4K6/MINK1  絲裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗體Tris-HCl緩沖液(1.5mol/L,pH8.8)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ATAD2  三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體1,4-二氫-1,2-二甲基-4-氧代-3-喹啉羧酸1,2-Dimethyl-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid對照藥材 分 子 式: C12H11NO3 分 子 量: 217.22064