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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

熱帶假絲酵母Fcγ (Fc Fragment of IgG) ELISA Kit 拉丁屬名: Candida  tropicalis

鴨疫里氏桿菌AVPR1A (Arginine Vasopressin Receptor 1A) ELISA Kit拉丁屬名: anatipestifer

松針散斑殼ADCY4 (Adenylate Cyclase 4) ELISA Kit拉丁屬名: Lophodermium pinastri

根瘤菌PHB (Prohibitin) ELISA Kit 用途: 固氮

威爾酵母PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces  willianus

謝瓦散囊菌CKLF (Chemokine Like Factor) ELISA Kit 拉丁屬名: Eurotium chevalieri

小克銀漢霉C0CX37 (Connexin 37) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

植物乳桿菌PP14 (Placental Protein14) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  plantarum

酸魚乳桿菌TEP1 (Telomerase Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  acidipiscis

卷枝毛霉卷枝變型GMCSF/CSF2(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor circinelloides f. circinelloides

毛柄金錢菌(金針菇)PLP1 (Proteolipid Protein 1, Myelin) ELISA Kit 用途: 食用

黑曲霉GATA4 (GATA Binding Protein 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  niger

大腸桿菌GDF5 (Growth Differentiation Factor 5) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia coli

大腸埃希氏菌ATF-1 (Activating Transcription Factor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

粗皮側耳（平菇）ANG III (Angiotensin III) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
改良安卡拉痘苗病毒探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格SH3MD2/RNF142  環(huán)指蛋白142抗體1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮3-Methyl-1-phenyl-1H-pyrazol-5(4H)-one化學標準品 分 子 式: C10H10N2O 分 子 量: 174.1992

RNF93/ZNF178  環(huán)指蛋白93抗體石蒜裂堿Lycorenine中藥標準品  分 子 式: C18H23NO4 分 子 量: 317.383

RNF13  環(huán)指蛋白13抗體香荊芥酚5-Isopropyl-2-methylphenol中藥標準品  分 子 式: C10H14O 分 子 量: 150.21756

RNF14  環(huán)指蛋白14抗體飽和硫酸銨溶液(SAS)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

RNF15  環(huán)指蛋白15抗體Tris-乙酸電泳緩沖液(50×TAE)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TRIM17/RNF16  環(huán)指蛋白16抗體青蒿素 M2H-Naphtho[8a,1-b]furan-2-one,

decahydro-9,10-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-,

(3R,3aS,6R,6aS,9R,10R,10aS)-對照藥材 分 子 式: C15H24O4 分 子 量: 268.34866

TRIM17/RNF16  環(huán)指蛋白16抗體五乙酸兒茶素酯2H-1-Benzopyran-3,5,7-triol,2-[3,4-bis(acetyloxy)phenyl]-3,4-dihydro-, 3,5,7-triacetate, (2R,3S)-對照藥材 分 子 式: C25H24O11 分 子 量: