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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

根際鏈霉菌GAL (Galanin) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces rhizosphaericus

葡萄球菌KLK7 (Kallikrein 7) ELISA Kit拉丁屬名: Staphylococcus sp.

黑曲霉LIPC (Lipase, Hepatic) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

靈芝(紅芝, 赤芝)αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁屬名: Ganoderma lucidum

釀酒酵母FcεR I (Receptor I for the Fc Fragment of IgE) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

毛柄金錢菌(金針菇)SGK2 (Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

聚貪噬菌NKB (Neurokinins B) ELISA Kit拉丁屬名: Variovorax  boronicumulans

蠟狀芽孢桿菌RIPK2 (Receptor TNFRSF Interacting Serine Threonine Kinase 2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  cereus

腸膜明串珠菌PDP (Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase) ELISA Kit 拉丁屬名: Leuconostoc  mesenteroides

假單胞菌C3a (Complement Component 3a) ELISA Kit用途: 在1/10LB培養(yǎng)基中以50mg/l的吡蟲啉為碳源培養(yǎng)，6天內(nèi)吡蟲啉降解率30%左右。

灰平鏈霉菌CALU (Calumenin) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces griseoplanus

污黑腐皮殼CTNNα1 (Catenin, Alpha 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Valsa sordida

死亡谷芽孢桿菌CYP26A1 (Cytochrome P450 26A1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  vallismortis

豆芽菌PAR4 (Protease Activated Receptor 4) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

禾谷Smad1/MADH1 (Mothers Against Decapentaplegic Homolog 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
猴痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒供應商RNF40  環(huán)指蛋白40抗體3-O-beta-D-葡糖苷雞納酸酯Quinovic acid 3-O-beta-D-glucoside對照藥材 分 子 式: C36H56O10 分 子 量: 648.82384

RNF44  環(huán)指蛋白44抗體酮麝香4-tert-butyl-2,6-dimethyl-3,5-dinitroacetophenone中藥標準品  分 子 式: C14H18N2O5 分 子 量: 294.31

RNF6  環(huán)指蛋白6抗體覆盆子酸Ursa-1,12-dien-28-oicacid, 2,19-dihydroxy-3-oxo-對照藥材 分 子 式: C30H44O5 分 子 量: 484.66736

RNF8  環(huán)指蛋白8抗體纖精酮2,2,4,4-tetramethyl-6-(3-methylbutanoyl)cyclohexane-1,3,5-trione中藥標準品  分 子 式: C15H22O4 分 子 量: 266.33278

TRIM3/RNF22  環(huán)指蛋白22抗體7-氧代-beta-谷甾醇Stigmast-5-en-7-one,3-hydroxy-, (3b)-對照藥材 分 子 式: C29H48O2 分 子 量: 428.69022

RNF10  環(huán)指蛋白10抗體L-蛋氨酸（甲硫氨酸)(S)-2-Amino-4-(methylthio)butanoic acid化學標準品 分 子 式: C5H11NO2S 分 子 量: 149.21134

RNF11  環(huán)指蛋白11抗體克班寧crebanine中藥標準品  分 子 式: C20H21NO4 分 子 量: 339.38504