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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

粉粒紅濕傘MAG (Myelin Associated Glycoprotein) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

*蛹蟲草（北冬蟲夏草、北蟲草）TRY (Trypsin) ELISA Kit 拉丁屬名: Cordyceps millitaris (L. ex Fr.) Link

頂孢頭孢霉Ly6a (Lymphocyte Antigen 6 Complex Locus A) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

皺紋單胞菌CPR (Cytochrome P450 Reductase) ELISA Kit 拉丁屬名: Rugamonas rubra

北極土地桿菌TAF2 (TATA Box Binding Protein Associated Factor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Pedobacter  arcticus

枯草芽孢桿菌TPO (Thyroid Peroxidase) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

隔離土地桿菌CT (Calcitonin) ELISA Kit拉丁屬名: Pedobacter insulae

炭疽芽胞桿菌TECK/CCL25 (Thymus Expressed Chemokine) ELISA Kit 拉丁屬名: anthracis

賴氨酸芽孢桿菌 拉丁屬名：Lysinibacillus? odysseyi 規(guī)格：凍干物 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:模式菌株 主要用途:分類；研究；教學(xué) 特征特性:細(xì)胞呈直桿狀，常以成對或鏈狀排列，具圓端或方端。細(xì)胞染色大多數(shù)在幼齡培養(yǎng)時(shí)呈現(xiàn)革蘭氏陽性，以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)。每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)一個(gè)芽孢，能適應(yīng)許多不良環(huán)境。好氧或兼性厭氧?；墚愷B(yǎng)菌，具有發(fā)酵或呼吸代謝類型。通常接觸酶陽性。 

細(xì)極鏈格孢 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究；教學(xué) 具體用途： 特征特性：菌落暗青色，分生孢子梗短鏈生或單生，卵形，倒棒狀，淡青褐色至深青褐色，具橫膈膜3-6個(gè)，縱、斜隔膜1-4個(gè)，分隔處略隘，25.0-39.5×9.0-13.0微米，喙及假喙柱狀，淡褐色，5.0-27.5×2.5-3.5微米。

賈巴爾普爾毛殼 拉丁屬名：Chaetomium jabalpurense 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

病毒 拉丁屬名：Avian influenza virus 規(guī)格：凍干物 用途：研究 教學(xué) 檢驗(yàn) 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

卷枝毛霉灰藍(lán)變型 拉丁屬名：Mucor circinelloides f. griseocyanus 規(guī)格：凍干物 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黏液桿菌 拉丁屬名：Mucilaginibacter rigui 規(guī)格：凍干物 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分類；研究；教學(xué) 特征特性:革蘭氏陰性菌，嚴(yán)格好氧。無孢子形成，無運(yùn)動(dòng)性，菌落形態(tài)圓形，光滑。生長溫度為4到37度，細(xì)胞大小0.4-0.8X0.8-2.5μm。 

Eucasphaeriacapensis Crous 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Eucasphaeria 種名加詞：Eucasphaeria 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究；教學(xué) 具體用途： 特征特性：子囊孢子無色，guttulatae,梭形到橢圓形，略彎曲， 1隔, (17–)19–25(–28) × 3–)3.5(–4) µm。分生孢子無色，寄主植物上(16–)20–22(–27) × (2–)2.5(–3)，培養(yǎng)下(22–) 25–30(–40) × 3(–4) µm。  

藤黃色短小桿菌 拉丁屬名：Curtobacterium luteum 用途：模式菌株 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黃孢平革菌 用途：紅麻制漿 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用 屬名：Phanerochete 種名加詞：chrysosporium 模式菌株：非模式菌株 主要用途：a:2:{i:0;s:4:研究;i:1;s:4: ;} 特征特性：寄生在沒有生命的木材上，擔(dān)子果革質(zhì)，鋪展?fàn)?，菌蓋蛤殼狀，有一短柄，子實(shí)層孔狀，生于菌褶上。菌落白色，菌肉白色；菌絲白色，蔓延于四周，低伏，基質(zhì)膜狀。 具體用途：紅麻制漿

暗黃紫色小單孢菌 拉丁屬名：Micromonospora fulvoviolacea 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

細(xì)極鏈格孢PLB (Phospholipase B) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

巴奈特酵母MTHFR (Methylenetetrahydrofolate Reductase) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces barnettii

煙管菌TTN (Titin) ELISA Kit拉丁屬名: Bjerkandera adusta

布氏白僵菌（卵孢白僵菌）MCF (Macrophage Chemotatic Factor) ELISA Kit用途: 鞘翅目昆蟲生物防治

枯草芽胞桿菌FCN1 (Ficolin 1) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母GKN1 (Gastrokine 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

大腸桿菌C/EBPδ (CCAAT/Enhancer Binding Protein, Delta) ELISA Kit用途: 教學(xué)科研，用于構(gòu)建orf8缺失突變株。
鄰單胞菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格人e(HBeAb)ELISA試劑盒 英文名稱：Human anti-hepatitis B virus e antibody，HBeAb ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

人表面(HBsAb)ELISA試劑盒 英文名稱：Human anti-hepatitis B virus surface antibody，HBsAb ELISA Kit特價(jià)促銷

人核心IgM(HBcAb-IgM)ELISA試劑盒 英文名稱：Human anti-hepatitis B virus core IgM，HBc-IgM antibody ELISA Kit進(jìn)口/原裝

PHD3 (Egln3; HIF-prolyl hydroxylase 3) 脯氨酸羥化酶(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配體2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化腎上腺素能受體β2 規(guī)格 0.1ml

Mast Cell Tryptase 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝

CACYBP 英文名稱： 鈣周期素結(jié)合蛋白 0.2ml

Anti-PPARGC1A/PGC-1 Alpha 過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

LP Ab-IgA(Human Legionella antibody IgA) ELISA Kit 人軍團(tuán)菌IgAMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Klf4 腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LASS4 長壽相關(guān)基因lASS4 規(guī)格 0.2ml

AChRab(Human acetylcholine receptor antibody) ELISA Kit 人乙酰膽堿受體 96T

PTPIP51 英文名稱： 蛋白酪酸磷酸酶相互作用蛋白51 0.2ml

Desmoglein 3 英文名稱： 橋粒芯蛋白3 0.1ml

β淀粉樣肽β-Amyloid 1-40/Aβ1-40 C端 Anti-β-Amyloid 1-40/Aβ1-40 0.1ml

Anti-Z-DEVD-FMK/FITC 熒光素標(biāo)記CASPASE3凋亡抑制劑IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Ezrin (Tyr353) 磷酸化埃茲蛋白 規(guī)格 0.1ml

Cyclin D2 周期素D2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒 英文名稱：Human cartilage oligomeric matrix protein,COMP ELISA Kit特價(jià)促銷

人軟骨糖蛋白39(HC gp-39)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Cartilage glycoprotein 39,HC gp-39 ELISA Kit進(jìn)口/原裝

CHMP1A 英文名稱： 染色質(zhì)修飾蛋白1A 0.2ml

Anti-PAX1 配對盒基因1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

ICE(Human Interleukin 1 Beta converting enzyme) ELISA Kit 人白介素1β轉(zhuǎn)換酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-NDRG1/Cap43 分化相關(guān)基因NDRG1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-4I1 白細(xì)胞介素4誘導(dǎo)蛋白1 規(guī)格 0.2ml

MMP-13 ELISA kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13 96T

PRMT6 英文名稱： 組蛋白精酸甲基轉(zhuǎn)移酶6 0.1ml