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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數據分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

釀酒酵母EL (EuglobulinLysis) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

缺陷短波單胞菌AMBP (Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor) ELISA Kit拉丁屬名: Brevundimonas diminuta

球毛殼菌CRYαB (Crystallin Alpha B)  ELISA Kit 拉丁屬名: Chaetomium globosum Kunze

肉色諾卡氏菌 PSAP (Prosaposin) ELISA Kit 拉丁屬名: Nocardia carnea

大奇異球菌IL-5 (Interleukin 5) ELISA Kit拉丁屬名: Deinococcus grandis

枯草芽孢桿菌SELE (E-Selectin) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

雙孢鐮孢PADI4 (Peptidyl Arginine Deiminase Type IV) ELISA Kit拉丁屬名: Fusarium dimerum

林肯鏈霉菌TCGF-Ⅲ (Tcell Growth Factor Ⅲ) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces lincolnensis

毛頭鬼傘IP-10/CXCL10 (Interferon Gamma Induced Protein 10kDa) ELISA Kit拉丁屬名: Coprinus comatus

牛奶  三聚胺FADS2 (Fatty Acid Desaturase 2) ELISA Kit拉丁屬名: 牛奶  三聚胺

新城疫病毒IL-20 (Interleukin 20) ELISA Kit拉丁屬名: Newcastle       disease virus

地下諾爾氏菌GLUT2 (Glucose Transporter 2) ELISA Kit拉丁屬名: Knoellia  subterranea

戊糖乳桿菌PKIβ (Protein Kinase Inhibitor Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Lactobacillus  pentosus

根瘤菌BF (Factor B) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

人參地土地桿菌SUMO2 (Small Ubiquitin Related Modifier 2) ELISA Kit拉丁屬名: Pedobacter  panaciterrae
米黑根毛霉探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格VEGF-B 英文名稱： 內皮生長因子B 0.1ml

DUOX2 英文名稱： 雙氧化酶2/甲狀腺氧化酶2 0.2ml

Anti-phospho-AMPK beta 1(Ser182) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Ecm2 英文名稱： 細胞外基質蛋白2 0.1ml

神經纖毛蛋白-1 Anti-NRP-1 0.1ml

Anti-Slit2/Slil3/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠神經遷移蛋白Slit2/3IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-p107(Thr369) 磷酸化視網膜母細胞瘤樣蛋白p107 規(guī)格 0.1ml

Carboxypeptidase H 英文名稱： 胰羧肽酶E 0.2ml

Anti-GP65/SDFR1/NPTN 間質細胞衍化因子受體1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CK-18(Human cytokeratin 18) ELISA Kit 人細胞角蛋白18Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-HDAC1/HD1 組蛋白去乙?；?Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Menin/Men1 Menin蛋白 規(guī)格 0.2ml

PON(Human paraoxonase) ELISA Kit 人對氧磷酶 96T

RBBP5 英文名稱： 視網膜母細胞瘤結合蛋白5 0.2ml

DAZ4 英文名稱： 缺失基因4 0.1ml

Anti-APC/Adenomatous Polyposis Coli 腺瘤樣Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

eIF3F 英文名稱： 真核翻譯起始因子3F 0.1ml

內皮細胞生長因子受體-3 Anti-VEGFR-3 0.1ml

Anti-TSARG6/FITC 熒光素標記生精細胞凋亡相關基因6IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-IKKi/IKKe(Ser172) 磷酸化核因子NFκB抑制蛋白激酶i 規(guī)格 0.1ml

TGF- Beta2 (Ttansforming Growth Factor – Beta2) 轉移生長因子–β2(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

CK6 英文名稱： 細胞角蛋白6 0.1ml

Anti-phospho-IKK alpha (Tyr463) 磷酸化KB抑制蛋白激酶αMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

C.albicans(Human Candida Albicans) ELISA Kit 人白色念珠菌Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Jak3 蛋白酪氨酸激酶JAK-3Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh L-Citrulline L-瓜氨酸 規(guī)格 0.2mg

uE3(Human ultra Estriol) ELISA KIT 人超敏游離雌三醇 96T

RHOBTB1 英文名稱： Rho相關結構域BTB蛋白質1 0.2ml