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客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

禾谷粘鞭ECF/CCL11 (Eosinophil Chemotactic Factor) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

玫瑰色考克氏菌SIGLEC10 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 10) ELISA Kit拉丁屬名: Kocuria rosea

假單胞菌屬FABP7 (Fatty Acid Binding Protein 7, Brain) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas  sp.

卷枝毛霉卷枝變型AGPA (Anti-Glucoprotein 210 Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor circinelloides f. circinelloides

卡利比克邁耶氏酵母PGAM2 (Phosphoglycerate Mutase 2) ELISA Kit拉丁屬名: Meyerozyma caribbica

黑曲霉PPAR-α (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  niger

大麗輪枝霉CSF2Rα (Colony Stimulating Factor 2 Receptor Alpha) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

根瘤菌TNNI2 (Troponin I Type 2, Fast Skeletal) ELISA Kit用途: 固氮

糙皮側(cè)耳TAGLN (Transgelin) ELISA Kit拉丁屬名: Pleurotus ostreatus

短密木霉FSH (Follicle-Stimulating Hormone) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

皮落青霉PRB1 (Basic Salivary Proline Rich Protein 1) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

耐冷冷桿菌TACR2 (Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Cryobacterium  psychrotolerans

短密青霉α Actin (Alpha-Actin) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium brevicompactum

巴斯德畢赤酵母PIAS1 (Protein Inhibitor of Activated STAT 1) ELISA Kit用途: 表達(dá)、分泌 磷脂酶

產(chǎn)氣莢膜梭菌 毒素A型TGM3 (Transglutaminase 3, Epidermal) ELISA Kit拉丁屬名: perfringens Type A
血吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格HSP-60( Heat shock protein-60) 熱休克蛋白-60(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

大鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒英文名稱：Rat CXC-chemokine ligand 16,CXCL16 ELISA Kit/原裝

大鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒英文名稱：Rat CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISA Kit/分裝

大鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit/原裝

大鼠C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒英文名稱：Rat C-Peptide ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

大鼠C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat C-type natriuretic peptide,CNP ELISA Kit/原裝

GITR (glucocorticoidinduced tumor necrosis factor receptor) 糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)壞死因子受體抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Cathelicidin 英文名稱： 抗菌肽CAMP 0.1ml

Anti-Phospho-FoxO4 (Ser193) 磷酸化叉頭蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

RANTES 大鼠趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-EBNA 3A EB病毒核抗原-3AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Na+/K+-ATPase Alpha1 Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATP酶α1多肽 規(guī)格 0.2ml

CLA(Human cutaneous lymphocyte-associated antigen) ELISA Kit 人皮膚淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原 96T

SRP1 英文名稱： 核蛋白相互作用蛋白1 0.2ml

人凝血酶(TM)ELISA試劑盒英文名稱：Human Thrombin，TM ELISA Kit/分裝

人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒英文名稱：Human thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA Kit特價(jià)促銷

人凝血酶受體(TR)ELISA試劑盒英文名稱：Human thrombin receptor,TR ELISA Kit/分裝

人凝血酶調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)ELISA試劑盒英文名稱：Human thrombinthrombomodulin compound,T-TM ELISA Kit特價(jià)促銷

NSE (neuron specific enolase) 神經(jīng)元特異性烯醇化酶抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-phospho-arfaptin 2(Ser260) 磷酸化ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ATF2(Ser322) 磷酸化活化復(fù)制因子2 規(guī)格 0.1ml

CLEC4C 英文名稱： C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員C 0.1ml

Anti-CCL9/CCL10 巨噬細(xì)胞蛋白-1γMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

FEP(Human Free erythrocyte proloporphyrin) ELISA Kit 人游離原卟啉Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Mast Cell Tryptase 肥大細(xì)胞蛋白酶7Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh JUP/Cateninma γ γ連環(huán)蛋白(Catenin γ ， γ鏈接素) 規(guī)格 0.2ml

MIF ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子 96T

Proteasome 20S beta 6 英文名稱： 蛋白酶體PSMβ6 0.2ml