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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

蘇云金芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus thuringiensis Berliner

大腸埃希氏桿菌拉丁屬名: Escherichia  coli

根瘤菌用途: 與小冠花共生固氮，1983年開始在陜西應(yīng)用

矩圓黑盤孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

宛氏擬青霉拉丁屬名: Paecilomyces variotii

壁芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus muralis

黃綠木霉拉丁屬名: Trichoderma aureoviride

球黑孢霉拉丁屬名: Nigrospora sphaerica

乳酒假絲酵母拉丁屬名: Candida  kefyr

谷氨酸棒桿菌拉丁屬名: Corynebacterium  glutamicum

熱灰鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces thermogriseus

果生鏈核盤菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

五原假黃單胞菌拉丁屬名: Pseudoxanthomonas wuyuanensis

運動替斯崔納菌拉丁屬名: Tistrella mobilis
假結(jié)核耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格Emp1 (epithelial membrane protein 1) 表皮膜蛋白1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml

鈣離子ATP酶通道蛋白 Anti-ATP2c1/Ca++ ATPase 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-EGFR(Ser991) 磷酸化表皮生長因子受體 規(guī)格 0.1ml

D-Hanks緩沖液(HBSS) 250ml 國產(chǎn)

ZNF217 英文名稱： 鋅指蛋白217 0.2ml

DLX4 英文名稱： DLX4 0.2ml

鈣離子ATP酶通道蛋白 Anti-ATP2c1/Ca++ ATPase 0.1ml

CD34 英文名稱： CD34 0.1ml

Anti-Phospho-EphA2 (Tyr594) 磷酸化酪氨酸蛋白激酶A2受體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

IL-15 小鼠白介素-15Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser217/221) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MTM1/Myotubularin 肌微管素1 規(guī)格 0.2ml

A Beta1-42(Human amyloid beta peptide 1-42) ELISA Kit 人β淀粉樣蛋白1-42 96T

SLC34A2 英文名稱： 磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白 0.1ml

蓖麻凝集素(RCA)ELISA試劑盒 英文名稱：Ricinus communis agglutinin,RCA ELISA Kit特價促銷

扁豆凝集素(LCA)ELISA試劑盒 英文名稱：Lens culinaris agglutinin,LCA ELISA Kit進口/原裝

菜豆凝集素(PHA)ELISA試劑盒 英文名稱：Phaseolus vulgaris agglutinin,PHA ELISA Kit進口/分裝

Cav-1 ELISA Kit 大鼠窖蛋白Caveolin1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Aurora B/FITC 熒光素標記極光激酶BIgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh EXTL 外生性骨疣樣蛋白2 規(guī)格 0.2ml

L-LDH ELISA Kit 大鼠L-鼠乳酸脫氫酶 96T

CSNK1D 英文名稱： 酪蛋白激酶δ1 0.2ml

Anti-ER-Beta 雌激素受體βMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

EPO 小鼠促紅細胞生成素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-FGFR3/CD333 成纖維細胞生長因子受體3Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/Cy3 Cy3標記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格 0.1ml

ATF-1(Human activating transcription factor-1) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)錄因子-1 96T

STK33 英文名稱： 絲酸/蘇酸激酶33 0.2ml