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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

擬枝孢鐮孢注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

鏈孢囊菌用途: 代謝產(chǎn)物具有抗菌活性。

食石蠟戈登氏菌拉丁屬名: Gordonia paraffinivorans

乳桿菌屬拉丁屬名: Lactobacillus  sp.

產(chǎn)芽孢梭菌(生孢梭菌)拉丁屬名: sporogenes

秀珍菇用途: 食用菌

光滑鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces levis

釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

豬屎豆根瘤菌拉丁屬名: Rhizobium sp.

乙酸鈣不動桿菌拉丁屬名: Acinetobacter calcoaceticus

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis

細極鏈格孢拉丁屬名: Alternaria tenuissima

蠟狀芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus  cereus

鉛黃腸球菌拉丁屬名: Enterococcus  casseliflavus
鵝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒供應(yīng)商Anti-TSH/FITC 熒光素標記促甲狀腺素IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-IKK beta(Ser476) 磷酸化KB抑制蛋白激酶β 規(guī)格 0.1ml

Tranthyretin 甲狀腺素運載蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

大鼠性因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit特價促銷

大鼠性因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA試劑盒英文名稱：Rat von Willebrand Factor cleaving protease,ADAMTS-13/vWF-cp ELISA Kit特價供應(yīng)

大鼠血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒英文名稱：Rat heme oxygenase 1,HO-1 ELISA Kit特價促銷

大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒英文名稱：Rat heme oxygenase 2,HO-2 ELISA Kit特價供應(yīng)

CD44 英文名稱： CD44 0.1ml

Anti-Phospho-p56Dok2(Tyr351) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Osteocalcin 大鼠骨鈣素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-EGFR(Tyr845) 磷酸化表皮生長因子受體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MYLK2 肌球蛋白輕鏈激酶2 規(guī)格 0.2ml

IgH(Human immunoglobulin heavy chain) ELISA Kit 人免疫球蛋白重鏈 96T

S100A8 英文名稱： S100鈣結(jié)合蛋白A8 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Caspase-9 (Tyr153) 磷酸化半胱氨酸蛋白酶9 規(guī)格 0.1ml

大鼠血清封閉液 10ml Gibco原料,2%血清

VDCC-L alpha 英文名稱： L-型電壓依賴型鈣通道α 0.1ml

DNA Polymerase gamma 英文名稱： DNA聚合酶γ/DNA pol γ 0.2ml

Anti-AF6/Afadin 絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

EFS 英文名稱： 對接蛋白EFS 0.1ml

多配體蛋白聚糖1 Anti-CD138/Syndecan-1 0.1ml

CTBP1 英文名稱： C端結(jié)合蛋白1 0.2ml

Anti-IL-17B 白介素-17BMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

bFGF-4(Human basic fibroblast growth factor 4) ELISA Kit 人堿性成纖維細胞生長因子4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-GRP94/gp96 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MMP-7 基質(zhì)金屬蛋白酶-7 規(guī)格 0.1ml

MMP-8(Human Matrix metalloproteinase 8/Neutrophil collagenase) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細胞膠原酶 96T

RASA1 英文名稱： Rho GTP酶激活蛋白1/骨肥大綜合征相關(guān)蛋白 0.2ml