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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

孟氏假單胞菌拉丁屬名: Pseudomonas  mandelii

綠粘帚霉注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黑曲霉拉丁屬名: Aspergillus niger van Tieghem

短波單胞菌拉丁屬名: Brevundimonas sp.

地衣芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus licheniformis

土壤成對桿菌拉丁屬名: Dyadobacter soil

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis

冷桿菌屬拉丁屬名: Cryobacterium  luteum

葡萄座腔菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

玉米大斑拉丁屬名: Setosphaeria turcica

鮑魚側耳注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

農藥殘留速測儀（農卡專用）規(guī)格: 套 微型 6通道

香菇拉丁屬名: Lentinula  edodes

腐皮鐮孢拉丁屬名: Fusarium solani

丁香暗黃鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces lilacinofulvus
含麩質谷物源性探針法熒光定量PCR試劑盒供應商CT13 英文名稱： /抗原13 0.2ml

Anti-CGP-39/YKL-40 軟骨糖蛋白39Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Caspase-6 人Caspase-6Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-DCN/Decorin 核心蛋白聚糖Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Nestin 巢蛋白/神經上皮干細胞蛋白 規(guī)格 0.1ml

Human Thymosin ELISA Kit 人胸腺肽 96T

TIE2 英文名稱： 生成素受體2 0.1ml

CD44v7 英文名稱： CD44V7 0.1ml

Anti-NCOA2/KAT13C 核受體輔助激活蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Human decay-accelerating factor,DAF ELISA Kit 人降解加速因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Smac/DIABLO 線粒體促凋亡蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Goat anti-rat IgG whole serum 羊抗大鼠IgG抗血清 規(guī)格 1ml

MK(Human Midkine) ELISA Kit 人中期因子 96T

phospho-p95 NBS1 (Ser343) 英文名稱： 磷酸化DNA修復蛋白NBS1 0.1ml

Human Insulin Receptor Beta,ISR- Beta ELISA KIT 人受體β 96T

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Anti-DRD4 多巴胺受體D4Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒 英文名稱：guinea pig Leukotriene B4,LT-B4 ELISA Kit 進口/分裝

豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒 英文名稱：Guinea pig leukotriene D4,LT-D4 ELISA Kit 特價供應

豚鼠表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒 英文名稱：Guinea pig Epidermal growth factor,EGF ELISA Kit 特價供應

CTDSPL2 英文名稱： CTDSPL2蛋白 0.2ml

Anti-CD86/B7-2 CD86Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

BIRC5/Survivin variant 細胞凋亡抑制因子4(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-CD83/HB15 CD83Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh OVA/SerpinB8 雞卵白蛋白/卵清蛋白 規(guī)格 0.1ml

CST2 Kit Human 人 Cystatin SA / CST2 ELISA配對 ELISA

Phospho-TSC2(Ser1418) 英文名稱： 磷酸化性硬化蛋白 0.1ml