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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

ATCC 34877拉丁屬名: Cryptococcus neoformans

毛霉屬拉丁屬名: Mucor  sp.

卷枝毛霉卷枝變型拉丁屬名: Mucor circinelloides f. circinelloides

原玻璃蠅谷氨酸桿菌拉丁屬名: Glutamicibacter protophormiae

短波單胞菌屬拉丁屬名: Brevundimonas  staleyi

沼澤粘液桿菌拉丁屬名: Mucilaginibacter  paludis

尖孢鐮孢拉丁屬名: Fusarium oxysporum

根際考克氏菌拉丁屬名: Kocuria rhizophila

高山腐霉拉丁屬名: Pythium takayamanum

芽胞桿菌用途: 分類、研究，具有 生物肥料潛力。

鏈孢囊菌用途: 代謝產(chǎn)物具有抗菌活性。

大豆慢生根瘤菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

滑菇注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黑曲霉拉丁屬名: Aspergillus  niger

豌豆根瘤菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
猴源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒供應商S100 Protein 1:300 濃縮液 0.1ml 進口分裝

UBE2E3 英文名稱： 泛素蛋白連接酶E3 0.2ml

DHPS 英文名稱： 脫氧輔合酶蛋白 0.2ml

Anti-phospho-ATF2(Thr69/71) 磷酸化活化復制因子2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

phospho-Ephrin B (Ser300) 英文名稱： 磷酸化Ephrin B 0.1ml

微管相關(guān)蛋白 Anti-Tau protein 0.1ml

Anti-TIF1 beta/KAP1/FITC 熒光素標記轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1βIgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CD45 英文名稱： 白細胞共同抗原 0.1ml

Anti-Phospho-PKA C (Thr197) 磷酸化蛋白激酶C亞性Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

PPIL1(Human peptidylprolyl isomerase(cyclophilin)-like 1) ELISA Kit 人肽酰脯氨酰異構(gòu)酶(親環(huán)蛋白)樣1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-SM Myosin (Smooth Muscle) 人心肌肌凝蛋白(平滑肌) 小鼠單抗Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ILP2 抑制細胞凋亡樣蛋白2 規(guī)格 0.2ml

ssDNA(human single stranded DNA Antibody) ELISA Kit 人抗單鏈DNA/變性DNA 96T

PP2A alpha + beta 英文名稱： 蛋白質(zhì)磷酸酶-2A 0.1ml

C6orf97 英文名稱： 6號染色體開放閱讀框97 0.2ml

Anti-CK2 細胞角蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Human visfatin 人內(nèi)臟脂肪素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CIDEB 促進凋亡基因Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NUBP1 核苷酸結(jié)合蛋白1 規(guī)格 0.2ml

RNAin RNAin(非凍型RNA樣品保存液) 10ml

TOP1MT 英文名稱： 線粒體DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅰ 0.1ml

CtIP 英文名稱： 視網(wǎng)膜母細胞瘤結(jié)合蛋白8 0.2ml

Anti-PDK1/PDPK1 3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

8-iso-PG(Human 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 人8異素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-LHR/CGR 促黃體生成素受體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KLK4 激肽釋放酶4 規(guī)格 0.1ml

PDGF-AB ELISA Kit 大鼠血小板衍生生長因子AB 96T

Phospho-PRK1(Thr774) + PRK2 (Thr816) 英文名稱： 磷酸化腺衍生內(nèi)皮生長因子 0.1ml