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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

乳酒假絲酵母拉丁屬名: Candida  kefyr

Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

谷氨酸棒桿菌Ⅲ型拉丁屬名: Corynebacterium  glutamicum Ⅲ

油葫蘆歐文氏菌拉丁屬名: Erwinia eogrylli

糞銹傘注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

Novosphingobium sp.拉丁屬名: Novosphingobium sp.

馬賽菌拉丁屬名: Massilia sp.

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus  subtilis

紫穗槐根瘤菌用途: 與紫穗槐共生固氮

白黃鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces alboflavus (Waksman et Curtis) Waksman et Henrici

杰丁畢赤酵母拉丁屬名: Pichia  jadinii

云南紅球菌拉丁屬名: Rhodococcus yunnanensis

蘇云金芽孢桿菌馬來西亞亞種注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

紫色變異鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces  violovariabilis

平菇PL-27注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
騾源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書ATG9B 英文名稱： 自噬相關(guān)蛋白9B 0.2ml

Anti-Aurora A /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠、、兔、馬、豬有絲分裂激酶AIgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

FASL ELISA Kit 大鼠凋亡相關(guān)因子配體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-APP695/770 /FITC 熒光素標記淀粉樣肽前體蛋白IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FAM46C FAM46C蛋白 規(guī)格 0.2ml

ADAMTS13/vWF-cp ELISA Kit 大鼠性因子裂解蛋白酶 96T

MTSS1 英文名稱： 轉(zhuǎn)移抑制蛋白1 0.1ml

CD63 英文名稱： 相關(guān)抗原 0.1ml

Anti-NF-L/68kDa neurofilament 低分子量神經(jīng)絲蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

GSH(Human glutathione) ELISA Kit 人谷胱甘肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-MCSF Receptor 巨噬細胞集落刺激因子受體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Jun D 活化蛋白激酶D 規(guī)格 0.1ml

ALCAM ELISA Kit 大鼠白細胞活化黏附因子 96T

PCNA(1C11) 英文名稱： 小鼠增殖細胞核抗原單克隆 0.1ml

Rhesus antibody Rh PHKG2 磷酸化酶激酶γ2 規(guī)格 0.2ml

Keratin,LMW 1:300(200) 濃縮液 0.1ml 進口分裝

Unc18-3 英文名稱： 突觸囊泡融合蛋白Unc18-3 0.2ml

CATSPER2 英文名稱： 陽離子通道相關(guān)蛋白2 0.2ml

Anti-Bcl-2 Bcl-2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

DNA Ligase IV 英文名稱： DNA連接酶4 0.2ml

芳香化酶 Anti-Aromatase 0.1ml

Cullin 4B 英文名稱： CUL4B蛋白 0.1ml

Anti-LIX1 LIX1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-SIRT1/FITC 熒光素標記沉默調(diào)節(jié)蛋白1IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Bassoon(BSN) Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

軸索過度生長抑制因子-A Anti-Nogo-A 0.1ml

RNF142 英文名稱： 環(huán)指蛋白142 0.2ml

protein 4.2 英文名稱： 紅細胞膜蛋白4.2 0.2ml