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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

硫氧化檸檬胞菌拉丁屬名: Citreicella thiooxidans

紅色鹽幾何形菌拉丁屬名: Halogeometricum  rufum

布氏乳桿菌拉丁屬名: Lactobacillus  buchneri

枇杷假尾孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

平菇用途: 食用菌

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis

模擬乳粉霉菌酵母菌質(zhì)控樣品(定量)拉丁屬名: 模擬乳粉霉菌酵母菌質(zhì)控樣品(定量)

黃色粘球菌*拉丁屬名: Myxococcus xanthus

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis

豬絲菌拉丁屬名: rhuriopathiae

短波單胞菌拉丁屬名: Brevundimonas sp.

鞘氨單胞菌屬拉丁屬名: Sphingomonas  sp.

漏斗多孔菌拉丁屬名: Polyporus arcularius

熱噬淀粉芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus  thermoamylovorans

好熱地芽孢桿菌拉丁屬名: Geobacillus kaustophilus
牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格ACTR 英文名稱： 絲酸/蘇酸蛋白激酶ATR 0.1ml

Anti-ATP-sensitive K+ channel subunit Kir6.2/FITC 熒光素標記ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

(Mouse anti-IgE receptor antibody) ELISA Kit 小鼠抗IgE受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CD80/B7-1/FITC 熒光素標記刺激分子B7-1蛋白IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DPCR1 DPCR1蛋白 規(guī)格 0.2ml

CA153 癌相關抗原 96T

MICA 英文名稱： MHC I類鏈相關蛋白A/組織相容性復合物MHCIa 0.1ml

CD8 英文名稱： CD8/CD8-β 0.1ml

Anti-Gax 生長終止特異性同源盒基因Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

PT(Human Prothrombin0 ELISA Kit 人凝血酶原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-PRAS40 (Thr246) 磷酸化蛋白激酶AKT底物1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HDL/high density lipoprotein 規(guī)格 0.1ml

C3(Mouse Complement 3) ELISA Kit 小鼠補體蛋白3 96T

p75 NGF Receptor 英文名稱： 神經(jīng)生長因子受體 0.1ml

人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒英文名稱：Human L-Selectin ELISA Kit 特價供應

BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐藥相關蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-c-Abl 非受體酪氨酸激酶c-AblMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-CHEK1(Ser317) 磷酸化細胞周期檢測點激酶1 規(guī)格 0.1ml

兔抗Biotin (生物素)血清 0.5ml 國產(chǎn)

WDR16 英文名稱： WD重復蛋白16 0.2ml

Phospho-Dab1 (Ser491) 英文名稱： 磷酸化Disabled 1 0.1ml

CWF19L1 英文名稱： CWF19L1蛋白 0.2ml

Anti-Integrin beta 5 整合素β5Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

P-gp(Human permeability glycoprotein) ELISA Kit 人P糖蛋白/滲透性糖蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Hck 造血細胞激酶Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MIP2/GRO Beta/CXCL2 巨噬細胞蛋白2( GROβ) 規(guī)格 0.1ml

CKMB(Human cytokinin MB) ELISA Kit 人激動異構酶/細胞分裂素MB 96T

RNFB 英文名稱： E3泛素蛋白連接酶B/環(huán)指蛋白B 0.2ml