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- 品牌：聯(lián)祖
- 產(chǎn)地：進(jìn)口、國產(chǎn)
- 貨號：LZR85802
- 發(fā)布日期： 2020-11-25
- 更新日期： 2025-02-06
| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 聯(lián)祖 |
| 貨號 | LZR85802 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系油菜RF2探針法qPCR試劑盒說明書
貨號：LZR85802
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
產(chǎn)品特點：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進(jìn)行多個檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
需要注意：
PCR反應(yīng)液請在冰中配制，然后置于PCR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物。
二反應(yīng)的準(zhǔn)備：
待各組份融化后先瞬時離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系，每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照，測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應(yīng)：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個循環(huán)開始，反應(yīng)條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
小鼠免疫球蛋白MElisa Kit圖片EGF Receptor (D38B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)100 ul
小鼠胰素樣肽-1Elisa Kit*錢Neurofilament-L (C28E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)100 ul
液體樣品 RNAout250 次品牌Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) Rabbit mAb100 ul
沉淀法 miRNA 分離試劑盒50 次品牌YTHDC1 (P561) Antibody100 ul
RNase 抑制劑 （ 小鼠源 ）3000U品牌SMARCB1/BAF47 (D9C2) Rabbit mAb100 ul
TRIzol 伴侶50 次*有賣XPB (2C6) Mouse mAb20 ul
96 孔板血液 DNAout（ 真空法 ）1次*錢XPB (2C6) Mouse mAb100 ul
小鼠甲狀腺球蛋白（TG）elisa分析檢測試劑盒WFS1 Antibody100 ul
小鼠單克隆抗體亞型鑒定elisa分析檢測試劑盒Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)100 ul
豚鼠白介素18（IL-18）elisa分析檢測試劑盒EZH1 (D6F1C) Rabbit mAb100 ul
人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1（CNR-1）elisa分析檢測試劑盒Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul
犬促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）elisa分析檢測試劑盒Phospho-p90RSK (Thr359) (D1E9) Rabbit mAb100 ul
貓5羥色胺/血清素/血清胺（5HT/ST）elisa分析檢測試劑盒Phospho-Stat3 (Ser727) (D4X3C) Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul
大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽（PⅠCP）elisa分析檢測試劑盒BIRC6 (D8B5) Rabbit mAb100 ul
類人猿降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）elisa分析檢測試劑盒Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb20 ul
植物（擬南芥）超氧化物歧化酶銅鋅2 葉綠體（CSD2）elisa分析檢測試劑盒Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb100 ul
乙型HA elisa分析檢測試劑盒FoxC1 (D8A6) Rabbit mAb100 ul
轉(zhuǎn)基因品系油菜RF2探針法qPCR試劑盒說明書Lactobacillus│plantarum分離基物: 泡菜(木瓜,黃瓜,蘿卜,苦耳瓜)提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 發(fā)酵制乳制品、泡菜、谷物制品、酸面包、飼料添加劑等。培養(yǎng)基: CM0006生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法
Pseudomonas│aeruginosa分離基物: LB培養(yǎng)基提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于銅綠假單胞菌鞭毛相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究。培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
Streptomyces│sp.提供形式: 其他模式菌株: no培養(yǎng)基: 38生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Muricauda│aquimarina分離基物: 水樣/深海底層水樣提供形式: 凍干物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
運動發(fā)酵單胞菌種屬: Zymomonas│mobilis分離基物: 腐爛水果提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)酒精培養(yǎng)基: 177生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
Fomes│fomentarius (L.) J. Kickx f.分離基物: 活木提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 藥用培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Olleya│marilimosa分離基物: 沉積物/深灰色沉積物提供形式: 凍干物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)蛋白酶菌株培養(yǎng)基: 821生長條件: 15℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
Diaporthe│vexans Gratz分離基物: 茄子提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 26存儲條件: 定期移植法
Mycosphaerella│populi (Auersw.) J. Schröt.分離基物: 枝桿提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 26存儲條件: 定期移植法
標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：
產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
