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上海聯(lián)祖生物科技有限公司
產(chǎn)品展廳
轉(zhuǎn)基因品系玉米676 PCR試劑盒供應(yīng)商
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:LZR85833
  • 發(fā)布日期: 2020-11-25
  • 更新日期: 2025-02-06
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 聯(lián)祖
貨號 LZR85833
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 %
CAS編號
是否進(jìn)口

產(chǎn)品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

參數(shù)規(guī)格:

產(chǎn)品名稱:轉(zhuǎn)基因品系玉米676 PCR試劑盒供應(yīng)商

貨號:LZR85833

產(chǎn)品規(guī)格:50次

產(chǎn)品運輸:低溫運輸

產(chǎn)品保存:-20℃保存

產(chǎn)品有效期:一年

產(chǎn)品特點:

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

 

需要注意:

PCR反應(yīng)液請在冰中配制,然后置于PCR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結(jié)合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng),增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性,能得到良好的PCR結(jié)果。

PCR的反應(yīng)條件:

因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數(shù)

根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。

如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結(jié)束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳(本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物。

二反應(yīng)的準(zhǔn)備:   

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應(yīng):   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環(huán):94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八個循環(huán)開始,每循環(huán)退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環(huán)開始,反應(yīng)條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

標(biāo)準(zhǔn)操作步驟:

產(chǎn)品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復(fù)到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉(zhuǎn)速(>13000×g)離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì);這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)elisa分析檢測試劑盒Phospho-Akt (Ser473) Antibody100 ul

人富組氨酸糖蛋白(HRG)elisa分析檢測試劑盒PIAS1 (D33A7) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul

人白介素10(IL-10)elisa分析檢測試劑盒Akt Antibody100 ul

人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl elisa分析檢測試劑盒VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)200 ul

CD6分子(CD6)elisa分析檢測試劑盒Akt Control Cell Extracts300 ul

牛三碘甲狀腺原氨酸(T3)elisa分析檢測試劑盒Phospho-Akt (Thr308) Antibody100 ul

綿羊白介素10(IL-10)elisa分析檢測試劑盒Phospho-Akt (Thr308) Antibody100 ul

5羥色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)elisa分析檢測試劑盒p16 INK4A (D3W8G) Rabbit mAb20 ul

小鼠肺平滑肌細(xì)胞說明書p16 INK4A (D3W8G) Rabbit mAb100 ul

MA-104(羅猴胎腎細(xì)胞)說明書Phospho-p53 (Ser392) Antibody20 ul

石斛酚108853-14-1價格Phospho-p53 (Ser392) Antibody100 ul

醉魚草皂苷 Ⅳ 特價供應(yīng)p53 Antibody20 ul

丙烯葡聚糖凝膠S-400 HR實驗步驟p53 Antibody300 ul

克霉唑保存Phospho-p53 (Ser15) Antibody100 ul

紫脲酸銨實驗步驟Phospho-p53 (Ser15) Antibody20 ul

5-硝基鄰菲啰啉保存Phospho-p53 (Ser15) Antibody100 ul

L-乳酸鈉使用說明書Phospho-p53 (Ser6) Antibody20 ul
轉(zhuǎn)基因品系玉米676 PCR試劑盒供應(yīng)商Rotavirus│Porcine rotavirus分離基物: 小腸、糞便提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分類和研究培養(yǎng)基: 0生長條件: 37存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;

Nocardiopsis│sp.分離基物: 鹽土提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: *環(huán)境培養(yǎng)基: CM0237生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥

Aspergillus│oryzae分離基物: 曲子提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀造醬油。培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法

Vibrio│sp.分離基物: 水樣/下層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 海洋細(xì)菌培養(yǎng)基: 471生長條件: 4℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Bacillus│horti分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Idiomarina│seosinensis分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1.生物降解;2.生物催化;3.生物活性物質(zhì)篩選; 4.海洋微生物生態(tài)學(xué)研究。培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

煙曲霉種屬: AspergillusfumigatusFresenius安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 15生長條件: 25-28℃

Saccharomyces│cerevisiae var.ellipsoideus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 橡子糖化液發(fā)酵用菌培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Trichoderma│harzianum提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 25℃存儲條件: 真空冷凍干燥法


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