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標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：

產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。

7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；

15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因構(gòu)建OTP增強(qiáng)子-CrylA基因探針法qPCR試劑盒規(guī)格

貨號：LZR86156

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

需要注意：

PCR反應(yīng)液請?jiān)诒信渲?，然后置于PCR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。

PCR的反應(yīng)條件：

因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數(shù)

根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。

如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會出現(xiàn)Smear。
使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)陽性對照和一個(gè)陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個(gè)樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）

3.樣品管：在 N+2 個(gè)PCR 管中加入下列成分：成分 N 個(gè)樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨(dú)加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物。

二反應(yīng)的準(zhǔn)備： 　　

待各組份融化后先瞬時(shí)離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系，每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對照，測試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 　　

三、PCR反應(yīng)： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;八個(gè)循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個(gè)循環(huán)開始，反應(yīng)條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
BrdU　含量：≥ 98%　規(guī)格：20 mg/支

聚氧月桂　含量：≥ 98%　規(guī)格：20 mg/支

Brij35　含量：≥ 98%　規(guī)格：20 mg/支

燦爛綠(亮綠)　含量：≥ 98%　規(guī)格：20 mg/支

Brilliant Green　含量：≥ 98%　規(guī)格：20 mg/支

燦爛黃　含量：≥ 98%　規(guī)格：20 mg/支

Brilliant yellow　含量：≥ 98%　規(guī)格：5 mg/支

溴綠　含量：≥ 98%　規(guī)格：5 mg/支

雪膽素 ;Dihydrocucurbi CAS號： 50298903 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

香蜂草苷 ;didymin CAS號： 14259473 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

香葉木素7O葡萄糖苷;Diosme CAS號： 20126594 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

新芒果苷;neomangiferin CAS號： 64809672 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

香紫蘇內(nèi);clareolide CAS號： 564205 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

香草;Vanillic acid CAS號： 121346 規(guī)格： 50mg 訂購|咨詢

夏佛塔苷;Schaftoside CAS號： 51938320 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

小白菊內(nèi);Parthenolide CAS號： 20554841 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

熊去氧膽;Ursodeoxycholi CAS號： 128132 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

柚皮甙二查爾;Naringin di CAS號： 18916171 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

血根堿;Sanguinarine CAS號： 2447543 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

香葉木素;Diosmetin CAS號： 520343 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

仙茅苷;Curculigoside CAS號： 85643192 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

腺苷;Adenosine CAS號： 58617 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

西貝母堿;Imperialine CAS號： 61825987 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

3-Amino-1,2,4-triazole,≥95%小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ) 進(jìn)口/國產(chǎn)

5-Aminoindazole,97%大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ) 進(jìn)口/國產(chǎn)

Oxazole,98%人肌激酶同工酶MB(CK-MB) 進(jìn)口/國產(chǎn)

Tetrazole犬肌紅蛋白(MYO/MB)   進(jìn)口/國產(chǎn)

4-Methyl-5-thiazoleethanol,≥98%人肌紅蛋白(MYO/MB) 進(jìn)口/國產(chǎn)

1,1'-Thiocarbonyldiimidazole,≥95.0%小鼠肌紅蛋白(MYO/MB) 進(jìn)口/國產(chǎn)

1-(Trimethylsilyl)imidazole,≥98.0%大鼠肌紅蛋白(MYO/MB) 進(jìn)口/國產(chǎn)

4-Nitroimidazole,97%人遲現(xiàn)抗原(VLA)  進(jìn)口/國產(chǎn)
轉(zhuǎn)基因構(gòu)建OTP增強(qiáng)子-CrylA基因探針法qPCR試劑盒規(guī)格Pseudomonas│pachastrellae分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1.生物降解；2.生物催化；3.生物活性物質(zhì)篩選；4.海洋微生物生態(tài)學(xué)研究。培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Rhizobium│crotolaria提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 695生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Sphingopyxis│flavimaris分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)脂肪酶菌株培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

釀酒酵母種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 酒精酵母培養(yǎng)基: CM0013生長條件: 25-28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Arthrobacter│agilis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 832生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法

Rhodotorula│sp.分離基物: 泥土提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no培養(yǎng)基: 13生長條件: 25-28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Bacillus│sp.提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究。培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Aspergillus│usamii提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 制液體曲。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Bradyrhizobium│japonicum分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 主要用于分類學(xué)研究培養(yǎng)基: 63生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法