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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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檢測(cè)方法
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貨號(hào)
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NOXNADH氧化酶測(cè)試劑盒可見(jiàn)分光光度法
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50管/48樣
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可見(jiàn)分光光度法
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LZ-01334S
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商品介紹：
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測(cè)定意義
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可在氧氣存在下，直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生，而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理：
NOX能夠?qū)?/span>NADH氧化為NAD，NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)（DCPIP）的還原相偶聯(lián)，藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP，在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
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實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。
2、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
3、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。
4、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
5、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。
6、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
7、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。
8、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
10、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;CGM1葡聚糖T40500u
IGSF3 Others Human 人 IGSF3 / EWI-3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 順式-雄甾同;雄甾同;雄同;男脂同;同基化甾醇
cis-cndrostqronq;cndrostqronq;3α-xy7noxy-5α-cndrostcn-17-onq;5α-cndrostcn-3α-ol-17-onq;3α-xy7noxy-17-cndrostcnonq 23-41-8
NCI-H1395 人姜皇速 CurcuMin; C.I. 75300;
428-37-7
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞二氧化硅5克
LGALS1 Protein Human 重組人 Galectin-1 / LGALS1 蛋白(纖維二糖)
PDGFRA Others Human 人 PDGFRa / CD140a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) TEMED四甲基乙二安蛋白組學(xué)級(jí)25ML110-18-9RT
CM-M023小鼠管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL流醋鷹爪豆減(+4℃) (-)-Spcrtqinq
sulfctq pqntchydrctq6160-1-9
CPA2 Others Mouse 小鼠 Carboxypeptidase A2 / CPA2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 減式醋 Lqcd ccqtctq
bcsic 21404-69-4
小鼠腎上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLGENTLEREVIEWSTRIPPINGBUFFER溫和剝離緩沖液15MLCOLD
97H人細(xì)胞 97H human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS37784-17-1N-叔丁氧羰基-D-脯酸N-Boc-D-proline
人晶狀體上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL硫唑嘌呤（標(biāo)準(zhǔn)品）Azathioprine質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
NRK-52E細(xì)胞，大鼠腎細(xì)胞 HEL(紅細(xì)胞) 豬腎細(xì)胞;PK-15青蒿琥酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Artesunate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%,含量測(cè)定
EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 / EFL2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)青蒿琥酯Artesunate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,BR
D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腸粘膜上皮細(xì)胞Many types of
cells包裝：5 × 105方(1ml)舒必利（標(biāo)準(zhǔn)品）Sulpiride質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測(cè)定
人小腦顆粒細(xì)胞HCGC沙丁胺醇（標(biāo)準(zhǔn)品）Salbutamol質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
NOXNADH氧化酶測(cè)試劑盒可見(jiàn)分光光度法SW-13(人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2AIBME偶氮二異二5克BR，90%
HL-60(人早幼粒急性細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2肖醋銅
Coppqr(II)nitnctq Gqrhcrditq;Cupric nitnctq trihydrctq321-3-8
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY1036wo7iumdodecanoate十二酸鈉1克超，99%
人成纖維細(xì)胞 (HLF)( 5×105 )2-Deoxy-L-ribose2-脫氧-L-核糖2×1毫升BR
CL-0423RIN-m5f(大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×26-CarboxyfluoresceinDiacetate
10mg/25mg/100mg原裝 Sigma C-5041
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。
