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上海聯(lián)祖生物科技有限公司
產(chǎn)品展廳
nadhnadp蘋果酸脫氫酶測(cè)試劑盒微量法
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產(chǎn)地:國(guó)產(chǎn)
  • 型號(hào):100管/96樣
  • 貨號(hào):LZ-01329S
  • 發(fā)布日期: 2020-12-01
  • 更新日期: 2025-02-07
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 國(guó)產(chǎn)
品牌 聯(lián)祖
貨號(hào) LZ-01329S
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
英文名稱
包裝規(guī)格 100管/96樣
純度 %
CAS編號(hào)
別名 NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測(cè)試盒
分子式
是否進(jìn)口


【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

NADPMDHNADP蘋果酸脫氫酶測(cè)試劑盒微量法

100管/96樣

微量法

LZ-01329S

商品介紹:

測(cè)定意義
MDH (EC1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH, NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中。

測(cè)定原理:

NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì)自然流下去。
2、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
3、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
4、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
5、實(shí)驗(yàn)時(shí),要使底物避光保存。
6、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加。沒有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
7、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
8、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
10、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
SK-MEL-1(人皮膚色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2TAPS;N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸質(zhì)量規(guī)格:>99%,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)TAPS

HEC-1-A(人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0410P3X63Ag8.653(小鼠瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 獼猴皮膚細(xì)胞;MMS7PI3K 抑制劑質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,進(jìn)分LY294002

人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞;D341Med羥乙基磺酸鈉質(zhì)量規(guī)格:>98.5%SHES

EGF Others Mouse 小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 羥乙基醋酸鉀質(zhì)量規(guī)格:>98.5%PHES

MGC-803 人細(xì)胞[Tyr8]緩激肽質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR[Tyr8] Bradykinin
CM-M015小鼠胰島細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL四氫shēng huà shì jì容量:0.5毫升

IFNA2 Others Mouse 小鼠 IFNA2 / Ierferon alpha 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 植酸酶 Phytase from wheat 9001-89-2 5G 通用試劑

小鼠膀胱成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL異維A醋 Isotrqtinoin 4729-48-

AtT-20小鼠細(xì)胞 AtT-20 mouse pituitary tumor cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS反丁希二酸shēng huà shì jì容量:2~8℃1克

IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)6969-71-7三唑酮1,2,4-Triazolo[4,3-a]pyridin-3(2H)-one
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D3 IV型膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL硫酸長(zhǎng)春堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Vinblastine Sulfate質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

HGC-27人細(xì)胞 Human硫酸長(zhǎng)春堿(進(jìn)分)Vinblastine Sulfate質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分Sigma V1377

CLMP Others Mouse 小鼠 ASAM / ACAM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 替莫唑胺Temozolomide質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

人小梁網(wǎng)細(xì)胞RNAHTMC miRNA5 μg替莫唑胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Temozolomide質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

ILKAP Others Human 人 ILKAP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 氨魯米特Aminoglutethimide質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP30,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
NADPMDHNADP蘋果酸脫氫酶測(cè)試劑盒微量法小鼠網(wǎng)織細(xì)胞;M5076 小鼠腸巨噬細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL雷瑣辛,英文名或英文縮寫:Resorinol,級(jí)別:IPC,99%,規(guī)格:250毫克

rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞 Rattus肖醋鈷;肖醋亞鈷;六水合肖醋鈷 Cobclfous nitnctq;Cobcltous nitnctq hqxchydrctq 1006--9

SMOC1 Others Human 人 SMOC1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) NEXTGEL12.5%SOLUTIONNEXT GEL 12.5%蛋白組學(xué)級(jí)透明無色液體RTsigma

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;Mao六扶鋁酸,英文名或英文縮寫:Ammonium fluoaluminate,級(jí)別:CP,41%,規(guī)格:5克

PROK1 Others Human 人 EG-VEGF / prokineticin-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (5’-1酸腺苷二鈉)
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。


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