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傳代方法：

產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。

細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；HH-01

形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣

生長特性: 懸浮生長

特征特性: 該細(xì)胞系來源于一成年男性的外周血。2010年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。

培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

傳代方法: 1:2傳代；5-6天一次

傳代情況: P3

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

注意事項：

1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
特別聲明：本產(chǎn)品及我公司所售其他產(chǎn)品均為科研類試劑產(chǎn)品，嚴(yán)禁用于藥物、醫(yī)療及其他非科研用途。

軸突導(dǎo)向因子1抗體英文縮寫：Netrin 1C25H26O5≥98%

酪氨酸激酶B抗體英文縮寫：TrkBC10H15NO≥98%

跨膜受體蛋白Notch-3抗體英文縮寫：Notch3C20H28O4≤90%

中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶ELANE抗體英文縮寫：Neutrophil ElastaseC19H22N2O4≥95%

病毒NS4B（65kDa）抗體英文縮寫：Hepatitis C Virus RNA-directed RNA polymeraseC21H26N2O3≥95%

神經(jīng)生長因子受體相關(guān)蛋白1抗體英文縮寫：NGFRAP1C21H26N2O4≥96%

死亡結(jié)構(gòu)域蛋白NRH2抗體英文縮寫：NRH2C19H22N2O3≥97%

神經(jīng)絲蛋白抗體英文縮寫：Neuronal thread protein AD7c-NTPC15H24O≥97%

磷酸化細(xì)胞核因子抗體英文縮寫：phospho-NFKB p65(Ser536)C27H45NO2≥98%

跨膜受體蛋白Notch-1抗體英文縮寫：Notch1C15H18N2O≥98%

磷酸化細(xì)胞核受體Rev-Erbα抗體英文縮寫：Phospho-NR1D1(Ser55 + Ser59)C16H20N2O≥98%

雞新城疫病毒抗體英文縮寫：Newcastle disease virusC15H18N2O≥98%

還原型輔酶Ⅱ/磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸抗體英文縮寫：NADPHC64H104O30≥98%

NIT2蛋白抗體英文縮寫：NIT2C15H12O4≥98%

神經(jīng)細(xì)胞分化因子1抗體英文縮寫：NeuroD1C21H22O9≥95%
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；HH-01規(guī)格TritonX-114　曲拉通X-114　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

TritonX-405　曲拉通X-405　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

CHAPS　CHAPS;3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

CHAPSO　CHAPSO；3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

1,4-Dithioerythritol　二硫赤蘚醇(DTE)；1,4-二硫代赤蘚醇　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

N'-Nitro-L-arginine-methylesterhydrochloride　N-硝基-L-精氨酸甲酯　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

N-Benzoyl-L-tyrosineethylester　N-苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(BTEE)　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

AEBSFHCl　AEBSF絲氨酸抑制劑　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

AEBSFHCl　AEBSF(進(jìn)分)　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

BestatinHCl　鹽酸貝他定(進(jìn)口)　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

1,10-Phenanthrolinehydrochloridemonohydrate　鄰菲啰啉鹽酸鹽，一水　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

Phosphoramidondisodiumsalt　膦酰二肽鈉　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

Decylβ-D-glucopyranoside　癸基喃葡萄糖;癸基吡喃葡萄糖苷　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

Dolutegravir,GSK1349572　德羅特韋(GSK-1349572,DTG)　質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

Dodecylglucopyranoside　十二烷基吡喃葡萄糖苷；月桂?；咸烟恰≠|(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級