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傳代方法：

產(chǎn)品僅用于科研收到細胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細胞隨即脫落下來。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細胞不適應(yīng)而造成生長不好。

細胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達的人細胞；PC-3-Cas9-576

形態(tài)特性: 上皮樣

生長特性: 貼壁生長,在軟瓊脂中成簇生長，并可懸浮生長

特征特性: 該細胞是采用慢病毒感染的方式使PC-3細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單，經(jīng)WesternBlotting驗證該可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件: F12K10%FBS；400ug/mlG418

傳代方法: 1:3~1:6傳代；每周2~3次換液。

傳代情況: C3

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

注意事項：

1.接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。

7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）產(chǎn)品僅用于科研觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
特別聲明：本產(chǎn)品及我公司所售其他產(chǎn)品均為科研類試劑產(chǎn)品，嚴禁用于藥物、醫(yī)療及其他非科研用途。

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Cas9穩(wěn)定表達的人細胞；PC-3-Cas9-576供應(yīng)商正常上皮細胞；RNCEC/HL-028RatNormalColonicEpithelialCellsRNCEC/HL-028Anti-CDK1 Polyclonal Antibody 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長特征特性: 該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS傳代方法: 1:3傳代，3-4天傳1次

正常上皮細胞；HNPEC/HL-022HumanNormalProstateEpithelialCellsHNPEC/HL-022Anti-CUL1 Polyclonal Antibody 上皮樣生長特性: 貼壁生長特征特性: 該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS傳代方法: 1:3傳代，3-4天傳1次

正常乳腺上皮細胞；HNBEC/HL-021HumanNormalBreastEpithelialCellsHNBEC/HL-021Anti-COMMD1 Polyclonal Antibody 上皮樣生長特性: 貼壁生長特征特性: 該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS傳代方法: 1:3傳代，3-4天傳1次