免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,十分鐘后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,使其完全覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標(biāo)本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
別 名 Lymphocytic choriomeningitis virus.RING finger protein Z; Protein Z; Zinc-binding protein; Z_LYCVA.
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應(yīng)用 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
產(chǎn)品名稱
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淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢蛋白抗體0.2ml/200μg
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英文名稱
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Anti-LCMV
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貨號
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LZK63846
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英文名稱 Anti-LCMV
中文名稱 淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢蛋白抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) LCMV
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 細(xì)菌及 淋巴細(xì)胞 t-淋巴細(xì)胞
蛋白分子量 predicted molecular weight: 10kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from LC LCMV
亞 型 IgG
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量 時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血,家兔、山羊、綿羊可采用采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。聯(lián)祖保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
人心肌細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Histone Deacetylase ELISA Kit
人心肌細(xì)胞-裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱human Histamine ELISA KIT
人*成纖維細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human total hemolytic complement ELISA Kit
人*成纖維細(xì)胞-心室裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human transferrin receptor ELISA Kit
人*成纖維細(xì)胞-心房裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Transforming Growth factor β1 ELISA kit
人角膜上皮細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Transforming Growth factor α ELISA KIT
人角膜細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Glycoprotein96 ELISA Kit
人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Tumor necrosis factor soluble receptorⅠELISA KIT
人晶狀體上皮細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Tumor necrosis factor soluble receptorⅡ ELISA KIT
人虹膜色素上皮細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Tumor necrosis factor β ELISA KIT
人結(jié)膜細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Tumor necrosis factor β ELISA KIT
人無色素睫狀上皮細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Tumor necrosis factor α ELISA KIT
人小梁網(wǎng)細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Granulocyte Chemotactic Protein-2 ELISA Kit
人羊膜上皮細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human Adiponectin ELISA Kit
人滋養(yǎng)層絨毛細(xì)胞裂解物 規(guī)格:20mg 英文名稱Human adiponectin ELISA Kit
豬生長激素釋放肽ghrelinGHRPGhrelin定量檢測試劑盒 免疫測定
豬促素受體GsaR定量檢測試劑盒 免疫測定
豬白介素αILα定量檢測試劑盒 免疫測定
豬食欲素受體OXR定量檢測試劑盒 免疫測定
豬β干擾素IFNβ/IFNB定量檢測試劑盒 免疫測定
人抗型肝炎病毒表面抗體HBsAb定量檢測試劑盒 免疫測定
小鼠酶(CA)試劑盒,ELISA分析檢測試劑盒 Mouse carbonic anhydrase ELISA Kit
小鼠降鈣素基相關(guān)肽(CGRP)試劑盒,ELISA分析檢測試劑盒 Mouse calcitonin gene related peptide ELISA Kit
小鼠胃動素(MTL)試劑盒,ELISA分析檢測試劑盒 Mouse Motilin ELISA Kit
淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢蛋白抗體0.2ml/200μg小鼠生長抑素(SS)試劑盒,ELISA分析檢測試劑盒 Mouse Somatostatin ELISA Kit
小鼠纖維蛋白原(FB)試劑盒,ELISA分析檢測試劑盒 Mouse FB ELISA Kit
小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (Actinin α )試劑盒,ELISA分析檢測試劑盒 Mouse Actinin α ELISA Kit
小鼠肌球蛋白(Myosin)試劑盒,ELISA分析檢測試劑盒 Mouse Myosin ELISA Kit