免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,十分鐘后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,使其完全覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標(biāo)本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強度。
別 名 kinase interacting with leukemia-associated gene (stathmin); Kinase interacting with stathmin; KIS; KIS protein kinase; KIST; Serine threonine protein kinase Kist; Serine/threonine-protein kinase Kist; U2AF homology motif (UHM) kinase 1; U2AF homology motif kinase 1; UHMK1; UHMK1_HUMAN.
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
產(chǎn)品名稱
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絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶KIST抗體(激酶相互作用與相關(guān)基因)0.2ml/200μg
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英文名稱
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Anti-KIST/UHMK1
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貨號
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LZK63947
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英文名稱 Anti-KIST/UHMK1
中文名稱 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶KIST抗體(激酶相互作用與相關(guān)基因)
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Rabbit
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶
蛋白分子量 predicted molecular weight: 47kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human KIST/UHMK1
亞 型 IgG
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量 時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血,家兔、山羊、綿羊可采用采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。聯(lián)祖保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
DAB法生物素雜交檢測試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgLiensinine
DNA包被溶液 規(guī)格:HPLC≥98%;10mgLiensinine Perchlorate
DNA溶解液 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGanoderic acid A
DNA稀釋液 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGanoderic acid B
ECL法雜交檢測試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGanoderic acid C2
ECL法生物素雜交檢測試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;10mgGanoderic acid C6
HRP標(biāo)記的抗抗體 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGanoderic acid D
HRP標(biāo)記的抗抗體 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGanoderic acid E
HRP標(biāo)記的抗生物素抗體 規(guī)格:HPLC≥98%;10mgGanoderic acid G
TMB法雜交檢測試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;10mgGanoderenic acid B
TMB法生物素雜交檢測試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;10mgGanoderenic acid D
X光片(5×7英寸) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgThiocolchicoside
X光片(8×10英寸) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgCoptisine
暗盒(5×7英寸) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgLipoic acid
暗盒(8×10英寸) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGentiopicroside
血小板子4(PF4)檢測試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
血小板子4(PF4)檢測試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)
糖血紅蛋白(HbA1C)檢測試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
纖維蛋白原(FG)檢測試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
髓細(xì)胞觸發(fā)受體1(TREM1)檢測試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
α1微球蛋白(α1M)檢測試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
牛血清白蛋白(BSA)檢測試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) General
人絨毛膜激素β(βCG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP2)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人乳脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶KIST抗體(激酶相互作用與相關(guān)基因)0.2ml/200μg人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTF AbIg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人一碳血紅蛋白(HbCO)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人一合成酶(NOS)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人一(NO)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人葉受體(FOLR)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T