免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟:
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,十分鐘后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,使其完全覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過(guò)0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標(biāo)本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
別 名 Kinesin 2 60/70kDa; Kinesin light chain 1; Kinesin2; Kinesin-2; KLC 1; KLC; KLC1; KLC1_HUMAN; KNS 2; KNS 2A; KNS2; KNS2A; Medulloblastoma antigen MU MB 2.50; MGC15245.
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
產(chǎn)品名稱
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驅(qū)動(dòng)蛋白2抗體0.2ml/200μg
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英文名稱
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Anti-KLC1/KNS2
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貨號(hào)
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LZK64010
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英文名稱 Anti-KLC1/KNS2
中文名稱 驅(qū)動(dòng)蛋白2抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來(lái)源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Cow, Horse, Rabbit, Zebrafish, Sheep
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞骨架 細(xì)胞外基質(zhì)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 65kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human KLC1
亞 型 IgG
抗體的制備過(guò)程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量 時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血,家兔、山羊、綿羊可采用采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。聯(lián)祖保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無(wú)載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過(guò)濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
甲、乙型病毒2聯(lián)PCR測(cè)定試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRibavirin
甲型副傷寒沙門氏菌PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRetinyl Palmitate
病毒PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgResorcinol
甲型病毒PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgReserpine
甲型病毒PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRepaglinide
間日瘧PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRebaudioside A
節(jié)瘤擬桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRauwolfia Serpentina
結(jié)核分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRanitidine Resolution Mixture
解脲脲原體PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRanitidine Hydrochloride
解脲支原體PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRamipril
芥末PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRaloxifene Hydrochloride
金黃色葡萄球菌PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRactopamine Hydrochloride
金黃色葡萄球菌甲氧西林耐藥基因PCR測(cè)定試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgRacemethionine
金黃色葡萄球菌熱穩(wěn)定定核酶(Dnase,192bp)常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格:HPLC≥96%;20mgQuininone
金黃色葡萄球菌萬(wàn)古霉素耐藥基因PCR測(cè)定試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgQuinidine Gluconate
干擾素α17(IFNα17)檢測(cè)試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
干擾素α17(IFNα17)檢測(cè)試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)
干擾素α16(IFNα16)檢測(cè)試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
干擾素α14(IFNα14)檢測(cè)試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
干擾素α13(IFNα13)檢測(cè)試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
干擾素α13(IFNα13)檢測(cè)試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)
干擾素α13(IFNα13)檢測(cè)試劑盒(學(xué)發(fā)光免疫分析法) Rattus norvegicus (Rat)
人組織蛋白酶D(cathD)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人組織蛋白酶K(cathK)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人組織蛋白酶抗體(Cath Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人組織相容性2K1K 區(qū)(H2K1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人組織型纖溶酶原激活劑(tPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
驅(qū)動(dòng)蛋白2抗體0.2ml/200μg人組織子(TF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人生長(zhǎng)抑素(SS)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP43)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人生長(zhǎng)激素釋放子(GHRF)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRPGhrelin)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T